碧云天生產的BJ5183-AD-1超級感受態(tài)細胞,英文名BJ5183-AD-1 Super Competent Cells,是一種可以用于腺病毒系統(tǒng)質??寺〔⒕哂休^高重組能力的E. coli BJ5183-AD-1即用型化學感受態(tài)細胞。使用PCAMBIA2301質粒進行熱激活轉化,轉化效率可以高達1×105cfu/μg DNA以上。
BJ5183-AD-1中攜帶pAdEasy-1質粒,其包含大部分人腺病毒5型的基因組序列(E1/E3基因缺失),表達供pAdEasy-1骨架質粒和pAdEasy穿梭質粒進行同源重組的所有組分,形成重組腺病毒質粒。實驗過程中可直接轉入線性化的攜帶目的基因的穿梭質粒,從而簡化了實驗步驟,并提高腺病毒質粒重組效率。
BJ5183-AD-1菌株的基因型為endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)[pAdEasy-1 (AmpR)]。其中sbcBC和recBC的雙重突變,賦予其較強的重組能力,有利于轉入的目的基因與腺病毒骨架質粒的重組[1];recA1可減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA的穩(wěn)定性;StrR使得該細胞具有硫酸鏈霉素抗性;pAdeasy-1使其具有氨芐抗性,一旦與穿梭載體重組,抗性消失。
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