中文名：Fluo-4 AM (鈣離子熒光探針)
英文名：Fluo-4 AM
純度：BioReagent，≥90%(HPLC)，2mM
貨號(hào)：F746068
Cas號(hào)：273221-67-3
存儲(chǔ)溫度：避光,-20°C儲(chǔ)存,干燥
運(yùn)輸條件：超低溫運(yùn)輸
穩(wěn)定性存儲(chǔ)：-20℃避光保存，6個(gè)月有效。
產(chǎn)品介紹：
?Fluo-4是一種將Fluo-3結(jié)構(gòu)中的Cl替換成F的鈣熒光探針。由于將Cl替換成了了電子吸引力更強(qiáng)的F，它的最大激發(fā)波長(zhǎng)會(huì)向短波長(zhǎng)處偏離10 nm左右。這個(gè)波長(zhǎng)更接近于氬激光器?的波長(zhǎng)，所以用氬激光?激發(fā)時(shí)，F(xiàn)luo-4的熒光強(qiáng)度比Fluo-3強(qiáng)?倍。Fluo-4, AM穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-4，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)luo-4若以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但是當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離?子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，最大激發(fā)波長(zhǎng)為494nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為516nm?？梢允褂眉す夤簿劢癸@微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離?子濃度的變化。
使?說明：for Human T cells
（1）試劑
2mM的Fluo-4, AM/DMSO（將1mg Fluo-4, AM溶于442μL DMSO）
Pluronic F127
Hanks balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline?(10mM HEPES, 1mM Na2HPO4, 137mM NaCl, 5mM KCl, 1mM CaCl2, 0.5mM MgCl2, 5mM Glucose, 0.1% BSA，pH 7.4)
（2）操作
①. 向Fluo-4, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127可以防止Fluo-4, AM在HBSS中聚合并能幫助其進(jìn)入細(xì)胞。
②. 用HBSS稀釋Fluo-4, AM溶液，制備4μM的Fluo-4, AM工作液。
③. 將Fluo-4, AM工作液加入細(xì)胞，在37℃培養(yǎng)20分鐘。
④. 加入5倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS，再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘。
⑤. 用HEPES buffer saline洗滌細(xì)胞3次，然后用HEPES buffer saline使細(xì)胞重懸浮，制成1×10^5 cells/mL的溶液。
⑥. 37℃下培養(yǎng)10分鐘，然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離?子檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)494nm，發(fā)射波長(zhǎng)516nm。
*標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先確定最佳條件。以上方法僅供參考。
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關(guān)鍵字： 鈣熒光探針 FIuo-4, AM;Fluo 4-AM ; 1-[2-Amino-5-(2,7-difluoro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5- methylphenoxy)ethane-N,N,N',N'-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester
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