異檸檬酸裂解酶(ICL)測(cè)定試劑盒/微量法/96樣

測(cè)定意義：

ICL（EC4.1.3.1 ）主要存在于植物和微生物中，油料作物種子在萌發(fā)過程中，通過乙醛酸循環(huán)及其他過程將脂肪轉(zhuǎn)變成碳水化合物。ICL  是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一。

測(cè)定原理：

CL  催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和 NADH  在 LDH   的作用下生成乙醇和 NAD ，NADH  在340nm  下有特征吸收峰，監(jiān)測(cè) 340nm  吸光度的減小速率可間接反應(yīng) ICL  活性。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96  孔板、研缽、冰和蒸餾水。

測(cè)定步驟：

1 、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min   以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2 、 樣本測(cè)定

（1）工作液的配置，將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中，充分混合溶解，置于 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃ （其它物種）水浴 5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

（2）在試劑四中加入 4mL  蒸餾 水，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
（3）在微量石英比色皿或 96  孔板中加入 10 μ L  樣本、150 μ L   工作液和 40 μ L  試劑四，混勻，立即記錄 340nm  處 20s   時(shí)的吸光值 A1  和 2min20s  后的吸光值 A2，計(jì)算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3  個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。