一、簡介 His 標簽蛋白(競爭法)快速檢測試劑盒是基于膠體金側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)的蛋白半定量檢測 試劑。主要結(jié)構(gòu)由樣品墊、金標墊、層析膜、吸水紙、背板等組成。在層析膜上固定有金標 抗體的二抗(質(zhì)控線)和帶有 His-tag 的蛋白(檢測線);在金標墊上固定有膠體金標記的 抗 His-Tag 的單克隆抗體。當待測樣品滴加到樣品墊時,通過毛細作用,液體向金標墊移動。 當不含有 His-Tag 蛋白的待測樣品通過金標墊時,His-Tag 金標抗體隨著層流移動到檢測線 位置,與固定在檢測線上的帶有 His-tag 的蛋白發(fā)生特異性結(jié)合,并在檢測線上形成酒紅色 條帶;當含有 His-Tag 蛋白的待測樣品通過金標墊時,His-Tag 金標抗體與待測樣本中的 His-Tag 蛋白發(fā)生特異性的結(jié)合,樣本中含有的 His-Tag 蛋白越多,與之結(jié)合的金標 His-Tag 抗體越多,剩余的游離 His-Tag 金標抗體越少,隨著層流移動到檢測線位置,游離的 His-Tag 金標抗體與固定在檢測線上的帶有 His-tag 的蛋白發(fā)生特異性結(jié)合,并在檢測線上形成淡淡 的酒紅色條帶或者不顯帶。當復(fù)合物移動到質(zhì)控線時,His-Tag 金標抗體被包被在質(zhì)控線的 金標抗體二抗所捕獲,并在質(zhì)控線上形成酒紅色條帶。通過判讀層析膜上檢測線和質(zhì)控線是 否顯色及顯色的強弱,判斷樣品中是否存在 His-Tag 蛋白。本試劑檢測下限為10ug/mL,即 當待測樣品中 His-Tag 蛋白的濃度達到10ug/ml 及以上濃度時,檢測線的強度會被有效的削 弱,顯示出淡淡的酒紅色條帶或不顯色。當檢測樣品中 His-Tag 蛋白濃度在10ug/mL 至 100ug/mL 時,檢測線顏色的深淺與樣品中 His-Tag 蛋白的濃度呈負相關(guān)。當樣本中的 His-Tag 蛋白濃度達到100ug/ml 以上時,檢測線發(fā)生消線即無肉眼可見條帶出現(xiàn)。
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