品名：Smart-RIP? RIP Kit，貨號：RIP-1001，品牌：Engibody
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NIH、麻省理工、哈佛、斯坦福等世界名校課題組青睞并長期采購的RIP試劑盒！
Smart-RIP? 保姆級RIP試劑盒的5大優(yōu)勢
1、本試劑盒適用于貼壁細胞、懸浮細胞、動物組織、植物組織。
2、本試劑盒包含適用于細胞漿RNA-RBP互作及細胞核RNA-RBP互作的RIP。
3、本試劑盒適用于經(jīng)典Native RIP及Crosslink 交聯(lián)法RIP（針對特別脆弱的RNA-RBP互作）。
4、本試劑盒適配下游實驗（RT-PCR、RT-qPCR以及轉(zhuǎn)錄組NGS二代測序）。
5、本說明書是一本RIP實驗的全面技術(shù)手冊。同時包含了表觀遺傳學的基礎(chǔ)知識和基本脈絡(luò)，匯總了RNA與各種蛋白互作的詳細信息。
保姆級RIP試劑盒 一盒在手，RIP無憂！
第一部分：RIP背景簡介及應(yīng)用場景
RNA與蛋白質(zhì)相互作用分析
95%的人類基因組實際上并不編碼蛋白質(zhì)，而是產(chǎn)生大量非編碼RNA，這些RNA在生命的生長和發(fā)育中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，與艾滋病病毒/艾滋病、白血病、糖尿病等各種疾病密切相關(guān)，并參與干細胞發(fā)育和表觀遺傳學的調(diào)節(jié)。RNA-蛋白質(zhì)復合物驅(qū)動幾乎所有細胞過程中基因表達的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)，包括剪接、核輸出、mRNA穩(wěn)定性和蛋白質(zhì)翻譯。因此，對轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和機制的理解取決于確定這些過程中RNA結(jié)合的變化。
RNA與蛋白質(zhì)相互作用的研究越來越受到科學家的關(guān)注，成為表觀遺傳學研究的熱點。
目前RNA研究的國自然熱點主要是mRNA、LncRNA、miRNA、circRNA。
RIP（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay），RNA與結(jié)合蛋白免疫共沉淀實驗，其原理是RNA-binding proteins (RBPs)蛋白與RNA復合物被RBP特異性抗體捕獲，隨后抗體-蛋白-RNA復合物被Protein A/G磁珠所富集，經(jīng)過洗滌步驟，最后洗脫目的RNA，純化得到的RNA，下游銜接常規(guī)標準PCR、熒光定量PCR或建庫并進行高通量二代測序。是一種用于體內(nèi)In Vivo檢測RNA-binding proteins (RBPs)蛋白與RNA片段相互作用的技術(shù)。
1、RIP和RNA-EMSA、CLIP、RNA Pull-down，這四種研究RNA-蛋白互作技術(shù)的內(nèi)在區(qū)別是什么？
2、RIP和RNA-EMSA的聯(lián)合分析，相互驗證
這是經(jīng)典研究策略，RIP是體內(nèi)In Vivo研究RNA和蛋白互作，RNA-EMSA是體外In Vitro進行RNA和蛋白互作的驗證，互相印證。
第二部分：RIP技術(shù)原理和技術(shù)流程
技術(shù)原理：
RIP（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay），RNA與結(jié)合蛋白免疫共沉淀實驗的基本原理是在活細胞狀態(tài)下裂解細胞把細胞內(nèi)的蛋白-RNA復合物釋放出來，然后用所研究的目的蛋白抗體免疫沉淀蛋白質(zhì)-RNA復合物，從而特異性地捕獲富集目的蛋白結(jié)合的RNA，用于下游的RT-PCR分析和RNA-Sequence測序。
RIP-RT-qPCR用于檢測通過蛋白特異性免疫沉淀富集得到的特定RNA的相對數(shù)量。RIP-Sequence能對蛋白-RNA相互作用進行全轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)的掃描分析。
技術(shù)流程：
根據(jù)研究的靶標蛋白-RNA復合物的結(jié)合穩(wěn)定性不同，采用2種略有不同的技術(shù)流程
1、Native型RIP
2、Crosslink甲醛交聯(lián)型RIP
第五部分：磁珠法RIP試劑盒組分清單
（共計18個組分，均可單獨購買）
| 編號 | 組分名稱 | 數(shù)量 | 保存 | 注意事項 |
| 下列組分收到后需儲存在 4 °C中，磁珠千萬不要冷凍。 |
| RIP-001 | RIP級Protein A/G 磁珠
(核酸預包被，非特異性RNA結(jié)合極其低) | 1 mL | +4 °C | 不能冷凍
不能高速離心 |
| RIP-002 | 磁珠洗滌液 | 15 mL | +4 °C |
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| RIP-003 | 磁珠-抗體結(jié)合反應(yīng)液 | 5 mL | +4 °C |
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| RIP-004 | 10×交聯(lián)終止劑 | 30 mL | +4 °C | 僅用于交聯(lián)法RIP |
| RIP-005 | RNA-Protein Extract Buffer | 15 mL | +4 °C |
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| RIP-006 | RIP Wash Buffer 1 | 15 mL | +4 °C |
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| RIP-007 | RIP Wash Buffer 2 | 15 mL | +4 °C |
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| RIP-008 | RIP Wash Buffer 3 | 15 mL | +4 °C |
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| RIP-009 | RIP Wash Buffer 4 | 15 mL | +4 °C |
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| RIP-010 | RIP Elution Buffer | 4 mL | +4 °C | 如有絮狀物，使用前需要置室溫恢復溶解 |
| RIP-011 | TCEP | 286 mg | +4 °C | 使用前配制，工作終濃度為50 mM |
| 下列組分收到后必須要儲存在 -20 °C中 |
| RIP-012 | RNA沉淀增強物 | 100 μL | -20 °C |
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| RIP-013 | RIP專用鹽溶液 | 1.5 mL | -20 °C |
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| RIP-019 | DNase I套裝（內(nèi)含反應(yīng)buffer） | 100 μL | -20 °C |
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| RIP-020 | RNase抑制劑 | 50 μL | -20 °C |
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| RIP-021 | 蛋白酶K | 100 μL | -20 °C |
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| RIP-022 | RIP級Normal Mouse IgG
陰性對照 | 100 μL | -20 °C |
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| RIP-023 | RIP級Normal Rabbit IgG
陰性對照 | 100 μL | -20 °C |
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RIP實驗結(jié)果展示
Smart-RIP? RIP kit 保姆級RIP試劑盒官網(wǎng)詳細頁面：
https://www.engibody.com/products/Smart-RIP-RIP-Kit.html
注意：本試劑盒僅用于科學研究，不用于臨床診斷。
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關(guān)鍵字： RNA;RNA結(jié)合蛋白;RIP;RBP;
復名表觀遺傳學（上海復名醫(yī)療科技有限公司），專注于表觀遺傳學研究工具的開發(fā)和表觀技術(shù)服務(wù)的提供。
經(jīng)過多年和全球著名大學表觀研究領(lǐng)域?qū)＜医淌诘慕涣骱吞接?，積累經(jīng)驗，精準解決表觀研究工具領(lǐng)域的痛點難點，在表觀基因組學、表觀轉(zhuǎn)錄組學和表觀蛋白組學領(lǐng)域均開發(fā)了一系列研究試劑盒并提供表觀技術(shù)服務(wù)，和哈佛大學，華盛頓大學，斯坦福大學，麻省理工學院，UCSC，UCSF，HHMI，德國海德堡大學，法國國家健康與醫(yī)學研究院inserm等世界名校均建立了密切的合作和交流，所開發(fā)的抗體，試劑，試劑盒受到了全球客戶的歡迎。
Engibody為復名表觀遺傳學旗下品牌，所開發(fā)的抗體，試劑，表觀試劑盒在全球范圍內(nèi)銷售，受到眾多世界著名大學課題組老師及醫(yī)藥500強巨頭的認可和喜愛。
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