產(chǎn)品描述
ER-Tracker dyes是一系列細胞膜滲透性的活細胞染料，選擇性結合內質網(wǎng)（ER）。對細胞染色和甲醛處理后，可以保留部分的活細胞染色特征。 ER-Tracker Red是一種藥物的熒光偶聯(lián)物，即BODIPY? TR標記的格列苯脲（BODIPY? TR Glibenclamide）。格列本脲，又名優(yōu)降糖（Glyburide），是一種磺酰脲類口服降糖藥，用來調查胰島素β細胞活性和胰島素分泌，以及研究心肌細胞功能和心律失常。
格列本脲能夠結合內質網(wǎng)上突出的ATP敏感性鉀通道（KATP）的磺脲類受體。
本品為DMSO儲存液，濃度為1mM。用于活細胞內質網(wǎng)染色，建議工作濃度約為1μM，需根據(jù)實際情況做調整。
參數(shù)信息
分子式：C44H42BClF2N6O7S2
分子量：915.2316
檢測濾片：TRITC
狀態(tài)：液體
Ex/Em：587/615nm
純度：≥95%
儲存條件：-20℃避光干燥
實驗方法
以下實驗方案是根據(jù)牛肺動脈內皮細胞（BPAE）調整所得，且已驗證可用于其他常規(guī)細胞系的染色。建議以下步驟作起始實驗的參考，請根據(jù)具體的細胞類型和實際情況來調整標記條件。
1.試劑準備
ER-Tracker Red以1mM的DMSO儲存液形式提供，使用前請將ER-Tracker Red 從冰箱內取出，確?；販刂潦覝鼗蛴?5℃水浴溫育直至完全融解，經(jīng)短暫離心將溶液沉到管底。使用前將儲存液根據(jù)單次用量分裝，≤-20oC避光干燥保存。
2.細胞染色
（1）制備染色工作液：將1mM ER-Tracker Red稀釋至工作濃度，建議工作濃度~1μM。為了減小染料過高引起的假象，建議使用能達到實驗目的的低濃度來完成染色。
【注】：在含Ca2+/Mg2+ 的Hank’s 平衡鹽溶液內進行染色可得到良好的結果。
（2）細胞染色：對于貼壁細胞，吸除培養(yǎng)基，用HBSS清洗細胞，加入預熱的染料工作液，37℃孵育15-30min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養(yǎng)基，并在熒光顯微鏡下觀察細胞。如果細胞需要固定，請?zhí)D到步驟3。
3.細胞固定
（1）固定細胞：用4%甲醛于37℃固定細胞2min。
（2）清洗和觀察細胞：固定后，用合適緩沖液清洗2次，每次5min。之后可進一步染色或滴加抗熒光淬滅劑封片后觀察。
【注】：不建議進行透化處理，因用Triton X-100做透化處理會導致熒光信號消失。
注意事項
1）整個染色過程中需注意避光。
2）ER-Tracker Red（1mM）在4℃，冰浴等較低溫度下會凝固而粘附在離心管官底、管壁或管蓋內，可將置于25℃水浴溫育片刻直至全部融解后使用。對于微量液體，每次使用前低速離心使得液體沉降至管底，再開蓋使用。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
關鍵字： ER-Tracker Red ;內質網(wǎng)紅色熒光探針;格列苯脲;
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