產(chǎn)品描述

ER-Tracker dyes是一系列細(xì)胞膜滲透性的活細(xì)胞染料，選擇性結(jié)合內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）。對細(xì)胞染色和甲醛處理后，可以保留部分的活細(xì)胞染色特征。 ER-Tracker Red是一種藥物的熒光偶聯(lián)物，即BODIPY? TR標(biāo)記的格列苯脲（BODIPY? TR Glibenclamide）。格列本脲，又名優(yōu)降糖（Glyburide），是一種磺酰脲類口服降糖藥，用來調(diào)查胰島素β細(xì)胞活性和胰島素分泌，以及研究心肌細(xì)胞功能和心律失常。

格列本脲能夠結(jié)合內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上突出的ATP敏感性鉀通道（KATP）的磺脲類受體。

本品為DMSO儲存液，濃度為1mM。用于活細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)染色，建議工作濃度約為1μM，需根據(jù)實際情況做調(diào)整。

參數(shù)信息

分子式：C44H42BClF2N6O7S2

分子量：915.2316

檢測濾片：TRITC

狀態(tài)：液體

Ex/Em：587/615nm

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

實驗方法

以下實驗方案是根據(jù)牛肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞（BPAE）調(diào)整所得，且已驗證可用于其他常規(guī)細(xì)胞系的染色。建議以下步驟作起始實驗的參考，請根據(jù)具體的細(xì)胞類型和實際情況來調(diào)整標(biāo)記條件。

1.試劑準(zhǔn)備

ER-Tracker Red以1mM的DMSO儲存液形式提供，使用前請將ER-Tracker Red 從冰箱內(nèi)取出，確保回溫至室溫或于25℃水浴溫育直至完全融解，經(jīng)短暫離心將溶液沉到管底。使用前將儲存液根據(jù)單次用量分裝，≤-20oC避光干燥保存。

2.細(xì)胞染色

（1）制備染色工作液：將1mM ER-Tracker Red稀釋至工作濃度，建議工作濃度~1μM。為了減小染料過高引起的假象，建議使用能達(dá)到實驗?zāi)康牡牡蜐舛葋硗瓿扇旧?/span>

【注】：在含Ca2+/Mg2+ 的Hank’s 平衡鹽溶液內(nèi)進(jìn)行染色可得到良好的結(jié)果。

（2）細(xì)胞染色：對于貼壁細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基，用HBSS清洗細(xì)胞，加入預(yù)熱的染料工作液，37℃孵育15-30min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養(yǎng)基，并在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。如果細(xì)胞需要固定，請?zhí)D(zhuǎn)到步驟3。

3.細(xì)胞固定

（1）固定細(xì)胞：用4%甲醛于37℃固定細(xì)胞2min。

（2）清洗和觀察細(xì)胞：固定后，用合適緩沖液清洗2次，每次5min。之后可進(jìn)一步染色或滴加抗熒光淬滅劑封片后觀察。

【注】：不建議進(jìn)行透化處理，因用Triton X-100做透化處理會導(dǎo)致熒光信號消失。

注意事項

1）整個染色過程中需注意避光。

2）ER-Tracker Red（1mM）在4℃，冰浴等較低溫度下會凝固而粘附在離心管官底、管壁或管蓋內(nèi)，可將置于25℃水浴溫育片刻直至全部融解后使用。對于微量液體，每次使用前低速離心使得液體沉降至管底，再開蓋使用。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。