黃嘌呤氧化酶（xanthione oxidase, XOD）試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
XOD（EC 1.17.3.2）催化黃嘌呤氧化生成尿酸和超氧陰離子，是活性氧主要來源之一；同時也是核苷酸代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動物的心，肺，肝臟等組織中，當肝功能受損時，XOD大量釋放到血清中，對肝損害的診斷具有特異性的意義。
測定原理：
XOD催化黃嘌呤產(chǎn)生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。
試劑組成和配制：
產(chǎn)品名稱 | OX004-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 30ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 2瓶 | 4℃ |
試劑三：液體 | 2ml | 4℃ |
說明書 | 一份 |
需自備儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至290nm，蒸餾水調(diào)零。
XOD檢測工作液的配制：用時在每瓶試劑二先加入0.42ml試劑三確保溶解混勻后，再加入試劑一定容至15ml，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。
測定前將XOD檢測工作液在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
準備96孔UV板一塊（非普通酶標板，普通酶標板只能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小于340nm務(wù)必使用UV板）。
5、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μl樣本和200μl工作液，立即混勻并計時，記錄290nm下初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA＝A2-A1。
XOD活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）XOD計算：
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1721×ΔA
2、組織、細菌或細胞中XOD計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr)÷T =1721×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=1721×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=3.44×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.1×10-4 L；ε：尿酸摩爾消光系數(shù)，1.22×104 L/ mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下的回歸曲線為y = 0.0063x，R2 = 0.9977；其中y為△A，x為尿酸濃度nmol/ml
1、血清（漿）XOD計算：
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/ml）＝（ΔA÷0.0063）×V反總÷V樣÷T
2、組織、細菌或細胞中XOD計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/mg prot）＝（ΔA÷0.0063）×V反總÷(V樣×Cpr)÷T
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/g 鮮重）＝（ΔA÷0.0063）×V反總÷（W ×V樣÷V樣總）÷T
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/104 cell）=（ΔA÷0.0063）×V反總÷（500×V樣÷V樣總）÷T
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.1×10-4 L；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
關(guān)鍵字： 黃嘌呤氧化酶（XOD）檢測試劑盒;
伊勢久（江蘇連云港）生物科技有限責任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運行，其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標桿企業(yè)。堅持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標和方向。