谷丙轉(zhuǎn)氨酶/丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(GPT/ALT)測定試劑盒/微量法/48樣
測定意義:
GPT(EC 2.6.1.2 )廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化氨基酸和酮酸轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),在氨基酸代謝中具有重要作用。此外,哺乳動物肝細(xì)胞 GPT 活性很高,當(dāng)肝細(xì)胞壞死,GPT 釋放到血液中,血清GPT 活性顯著增高。因此,GPT 被世界衛(wèi)生組織推薦為肝功能損害最敏感的檢測指標(biāo)。
測定原理:
GPT 催化丙氨酸和α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),生成丙酮酸和谷氨酸;加入 2,4-二硝基苯肼溶液,不僅終止上述反應(yīng),而且與酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在堿性條件下呈紅棕色,可以在 505nm 讀取吸光值并計(jì)算酶活力。
試驗(yàn)中所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。測定步驟:在 EP 管或在 96 孔板中加入下列試劑
試劑名稱(μL)
測定管
對照管
待測樣本
10
煮沸 10min 的待測樣本
試劑一
25
蒸餾水
混勻后,37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)準(zhǔn)確反應(yīng) 20min
試劑二
試劑三
240
混勻,室溫(25℃) 放置 10min ,在 505nm 波長處測各管吸光度 A。ΔA=A 測定管-A 對照管。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管。
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
上海酶聯(lián)生物科技有限公司
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