米德爾堡病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 米德爾堡病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Middelburg Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR3383 |
檢測原理與特點
技術(shù)原理：基于染料法熒光定量PCR技術(shù)，通過特異性引物擴增米德爾堡病毒保守序列，結(jié)合熒光信號實時監(jiān)測靶標(biāo)核酸濃度。
核心優(yōu)勢：
高靈敏度：可檢測低至幾百拷貝/反應(yīng)的病毒核酸。
高特異性：引物針對米德爾堡病毒保守區(qū)設(shè)計，避免與其他病毒核酸交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混優(yōu)化試劑，用戶僅需提供模板DNA/RNA。
雙重功能：支持定性和定量檢測，定量線性范圍達5個數(shù)量級。
內(nèi)控設(shè)計：提供陽性對照（1×10^6~10^8拷貝/μL）和陰性對照，確保結(jié)果可靠性。
試劑盒組成
主反應(yīng)混合液：2×qPCR MagicMix（含熒光染料、dNTPs、聚合酶等）
專用模板稀釋液：1 mL（用于樣本稀釋）
引物混合物：特異性米德爾堡病毒引物（預(yù)混）
陽性對照：米德爾堡病毒PCR陽性對照（1×10^8拷貝/μL）
使用手冊：詳細(xì)操作流程及注意事項
實驗操作步驟
樣本制備：
建議設(shè)置N+2個提取反應(yīng)（N為待測樣本數(shù)，額外增加陽性對照和陰性對照）。
陽性對照：10μL試劑盒提供的陽性對照+水至樣本終體積。
陰性對照：以水替代模板。
PCR擴增：
反應(yīng)體系：20μL/反應(yīng)（含模板、引物混合物、主反應(yīng)液）。
推薦循環(huán)參數(shù)：預(yù)變性95℃ 5min；擴增40循環(huán)（95℃ 15s，60℃ 30s）。
結(jié)果分析：
定性檢測：通過擴增曲線和Ct值判定陰陽性。
定量檢測：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算病毒拷貝數(shù)。
電泳驗證（可選）：取5-10μL產(chǎn)物進行1.5%-2%瓊脂糖凝膠電泳，預(yù)期條帶約200bp。
注意事項
污染控制：若陰性對照出現(xiàn)擴增，表明實驗污染，需重新檢測。
樣本要求：建議使用純化后的病毒RNA/DNA，避免抑制劑干擾。
保存與運輸：避免反復(fù)凍融，試劑解凍后需充分混勻。
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關(guān)鍵字： 米德爾堡病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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