馬動(dòng)脈炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 馬動(dòng)脈炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Equine Arteritis Virus (EAV) Dye-based qRT-PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR3412 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用染料法熒光定量RT-PCR技術(shù)，專用于檢測(cè)馬病毒性動(dòng)脈炎病毒（Equine Viral Arteritis Virus, EVA）RNA。該病毒為RNA病毒，可導(dǎo)致馬匹發(fā)熱、水腫、呼吸道癥狀及高流產(chǎn)率。本產(chǎn)品基于保守基因序列設(shè)計(jì)引物，具有高靈敏度和特異性，適用于科研、臨床診斷及檢疫。
檢測(cè)原理
通過逆轉(zhuǎn)錄（RT）將病毒RNA轉(zhuǎn)化為cDNA，再經(jīng)熒光定量PCR擴(kuò)增目標(biāo)片段。染料（如SYBR Green）與雙鏈DNA結(jié)合后發(fā)射熒光信號(hào)，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度定量病毒載量。
試劑盒組成
RT-PCR預(yù)混液：含逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、dNTPs及緩沖液。
引物混合液：針對(duì)EVA病毒保守序列設(shè)計(jì)。
陽(yáng)性對(duì)照：非傳染性DNA片段（86bp，10E8拷貝/μL）。
模板稀釋液：用于標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋。
病毒裂解液試用裝（可選）：兼容多數(shù)RNA提取試劑盒。
操作步驟
1. 樣本制備
使用RNA提取試劑盒（如柱式病毒RNAout）提取樣本RNA，溶于無RNase水中。
2. 陽(yáng)性對(duì)照稀釋
按10倍梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照（10E2-10E7拷貝/μL），標(biāo)記為2-7號(hào)管，冰上保存。
3. RT-PCR反應(yīng)體系（20μL）
| 組分 | 體積（μL） |
| 預(yù)混液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板RNA/對(duì)照 | 5 |
| 無RNase水 | 3 |
4. 反應(yīng)程序
| 步驟 | 溫度/時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ 15min | 1 |
| 預(yù)變性 | 95℃ 5min | 1 |
| 擴(kuò)增 | 95℃ 15s → 60℃ 30s | 40 |
5. 數(shù)據(jù)分析
使用儀器軟件生成標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本Ct值及病毒拷貝數(shù)。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本制備、試劑配制及擴(kuò)增需在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行，避免污染。
質(zhì)量控制：每批實(shí)驗(yàn)需包含陰性和陽(yáng)性對(duì)照。
保存要求：反復(fù)凍融不超過3次，避免反復(fù)解凍預(yù)混液。
生物安全：陽(yáng)性對(duì)照為滅活片段，但仍需按生物安全二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)操作。
臨床意義
快速檢測(cè)EVA病毒有助于早期診斷和疫情控制，尤其對(duì)妊娠母馬（流產(chǎn)率>90%）及馬駒的防控至關(guān)重要。
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關(guān)鍵字： 馬動(dòng)脈炎病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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