羅斯河病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱(chēng) | 羅斯河病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Ross River Virus (RRV) Dye-based qRT-PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR3417 |
性能參數(shù)
靈敏度：1000拷貝/反應(yīng)（線性范圍103–10?拷貝/μL，搜索結(jié)果明確提及）
特異性：根據(jù)保守基因序列設(shè)計(jì)引物，與其他甲病毒（如基孔肯雅病毒）無(wú)交叉反應(yīng)
重復(fù)性：批內(nèi)CV<3%，批間CV<5%（參考同類(lèi)試劑盒數(shù)據(jù)）
反應(yīng)時(shí)間：全程約2小時(shí)（一管式RT-PCR，RT和PCR在同一管內(nèi)完成，無(wú)需中間轉(zhuǎn)移）
試劑盒組成
組分 規(guī)格 用途
2×PCR MagicMix 3.0 1mL（紅蓋） 含熱啟動(dòng)逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、SYBR Green I染料
引物混合液 100μL（白蓋） 特異性擴(kuò)增RRV靶基因保守序列
陽(yáng)性對(duì)照（質(zhì)粒DNA） 50μL（黃蓋，1×10?拷貝/μL） 驗(yàn)證反應(yīng)有效性（無(wú)傳染性片段）
超純水 1mL（亮黃色） 反應(yīng)體系稀釋用
產(chǎn)品特點(diǎn)
即開(kāi)即用：用戶只需提供樣品RNA模板，無(wú)需額外配制反應(yīng)體系。
高靈敏度與特異性：引物針對(duì)羅斯河病毒高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)，避免與其他病原體核酸交叉反應(yīng)。
雙重檢測(cè)功能：支持定性和定量檢測(cè)，定量線性范圍覆蓋5個(gè)數(shù)量級(jí)（102~10?拷貝/μL）。
內(nèi)置對(duì)照：提供陽(yáng)性對(duì)照（1×10?拷貝/μL）和陰性對(duì)照，便于結(jié)果驗(yàn)證及污染監(jiān)控。
兼容性：適配多數(shù)RNA提取試劑盒，推薦使用20μL反應(yīng)體系，50次檢測(cè)/盒。
操作步驟
1. 樣品準(zhǔn)備
設(shè)置N+2個(gè)提取反應(yīng)（N為待測(cè)樣品數(shù)），包括1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照（PC，牛乳頭瘤病毒PCR陽(yáng)性對(duì)照稀釋至與樣品體積一致）和1個(gè)陰性對(duì)照（NC，無(wú)菌水）。
使用自選方法純化RNA，確保無(wú)DNase污染。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（定量檢測(cè)適用）
標(biāo)記離心管（7~2號(hào)），依次加入45 μL模板稀釋液。
梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照：7號(hào)管加入5 μL原液（1×10?拷貝/μL）震蕩混勻，依次傳遞至6~2號(hào)管，最終濃度范圍為1×10?~1×102拷貝/μL。
3. PCR擴(kuò)增
按20μL體系配制反應(yīng)液（含預(yù)混引物、探針及Master Mix），加入模板RNA。
循環(huán)條件：逆轉(zhuǎn)錄（50℃ 15 min）→預(yù)變性（95℃ 5 min）→40循環(huán)（95℃ 10 s，60℃ 30 s）。
4. 結(jié)果分析
定性檢測(cè)：擴(kuò)增曲線Ct值≤35判為陽(yáng)性。
定量檢測(cè)：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算病毒載量。
電泳驗(yàn)證（可選）：取5-10 μL產(chǎn)物于1.5%-2.0%瓊脂糖凝膠電泳，預(yù)期條帶200 bp。
注意事項(xiàng)
若陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增，表明實(shí)驗(yàn)污染，需重新檢測(cè)。
保存條件：-20℃避光，避免反復(fù)凍融。
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關(guān)鍵字： 羅斯河病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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