類天花病毒染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 類天花病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Alastrim Virus Dye-based qPCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR3429 |
產(chǎn)品用途
本試劑盒專用于類天花病毒（如猴痘病毒、牛痘病毒等）核酸的熒光定量PCR檢測，適用于科研領(lǐng)域，不可用于臨床診斷。
技術(shù)原理
采用染料法熒光定量PCR技術(shù)，通過雙鏈DNA結(jié)合染料（如SYBR Green I）在擴增過程中釋放熒光信號，實時監(jiān)測靶基因擴增情況，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線實現(xiàn)絕對定量。
產(chǎn)品特點
高靈敏度：檢測下限可達幾百拷貝/反應(yīng)。
高特異性：針對類天花病毒保守序列設(shè)計引物，避免交叉反應(yīng)。
便捷性：即開即用，用戶僅需提供病毒核酸樣本。
穩(wěn)定性：-20℃保存，有效期12個月。
防污染設(shè)計：一管式閉管檢測，減少氣溶膠污染風(fēng)險。
試劑盒組分
核心組分：預(yù)混qPCR Master Mix（含熱啟動Taq酶、dNTPs、緩沖液及熒光染料）。
引物：針對類天花病毒靶基因設(shè)計的特異性引物。
陽性對照：含類天花病毒靶序列的標(biāo)準(zhǔn)品（用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線）。
陰性對照：無核酸酶水。
實驗步驟
樣本準(zhǔn)備：提取待測樣本核酸，建議使用柱式核酸提取試劑盒。
試劑解凍：實驗前1小時將試劑盒置于室溫平衡，避免反復(fù)凍融。
反應(yīng)體系配制（20μL/反應(yīng)）：
預(yù)混Master Mix：10μL
引物混合液：2μL
模板DNA：2μL
無核酸酶水：補足至20μL。
PCR擴增程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（熒光采集）；
熔解曲線分析（可選）：60℃~95℃，升溫速率0.5℃/秒。
數(shù)據(jù)分析：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本中靶基因拷貝數(shù)。
注意事項
移液精度：使用校準(zhǔn)后的移液器（誤差≤2%），更換槍頭避免交叉污染。
避光操作：熒光染料需避光保存，反應(yīng)管避免強光直射。
防污染措施：實驗分區(qū)操作（樣本處理區(qū)、PCR配制區(qū)、擴增區(qū)），使用帶濾芯槍頭。
質(zhì)量控制：每批次實驗需包含陰性對照（監(jiān)控污染）和陽性對照（驗證試劑有效性）。
儲存條件
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融（分裝后凍存建議≤3次）。
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