95% cas 186033-10-3；Digoxigenin-11-UTP，我司供應(yīng)的產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用。

Digoxigenin-11-UTP 是一種重要的分子生物學(xué)試劑，主要用于核酸（尤其是RNA）的非放射性標(biāo)記與檢測(cè)。

核心功能：核酸標(biāo)記探針的制備

Digoxigenin-11-UTP 是一種經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的核苷酸。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是：

• UTP部分：是合成RNA的基本構(gòu)建單元之一（尿苷三磷酸）。

• Digoxigenin部分：一種來(lái)源于毛地黃植物的類固醇半抗原，具有極強(qiáng)的免疫原性。

• “11-”連接臂：通過(guò)一個(gè)11個(gè)碳原子的連接臂將地高辛配基連接到UTP的堿基（尿嘧啶）上。這個(gè)設(shè)計(jì)旨在盡量減少地高辛分子對(duì)RNA聚合酶識(shí)別和利用該核苷酸的干擾。

主要應(yīng)用領(lǐng)域

1. 原位雜交

• 最常見(jiàn)和經(jīng)典的應(yīng)用。用于在組織切片、細(xì)胞或染色體標(biāo)本中定位特定的RNA或DNA序列。

• 原理：在制備RNA探針時(shí)，將 Digoxigenin-11-UTP 與普通的 ATP、CTP、GTP 混合，通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄（常用T7、SP6等RNA聚合酶）合成帶有地高辛標(biāo)記的RNA探針。該探針與樣品中的目標(biāo)核酸序列雜交后，再用抗地高辛抗體（通常偶聯(lián)有堿性磷酸酶AP或熒光基團(tuán)）進(jìn)行免疫檢測(cè)，從而精確定位目標(biāo)分子的位置。

• 優(yōu)勢(shì)：分辨率高，能在形態(tài)學(xué)完整的細(xì)胞中觀察基因表達(dá)的位置。

2. Northern Blot

• 用于檢測(cè)特定RNA分子的存在、大小和表達(dá)量。

• 用地高辛標(biāo)記的RNA探針與固定在膜上的RNA進(jìn)行雜交，然后通過(guò)化學(xué)發(fā)光或顯色反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。其靈敏度可與放射性同位素（如32P）標(biāo)記相媲美，但更安全、穩(wěn)定。

3. 斑點(diǎn)/狹縫雜交

• 用于快速檢測(cè)樣品中特定核酸的豐度，無(wú)需進(jìn)行電泳分離。

4. 微陣列分析

• 在基因表達(dá)譜芯片中，可用 Digoxigenin-11-UTP 標(biāo)記的cRNA或cDNA作為靶標(biāo)，與芯片上的探針雜交后進(jìn)行檢測(cè)。

工作原理（簡(jiǎn)述）

1. 標(biāo)記：通過(guò)酶促反應(yīng)（如體外轉(zhuǎn)錄、隨機(jī)引物標(biāo)記、末端標(biāo)記等，其中體外轉(zhuǎn)錄最常用），將 Digoxigenin-11-UTP 摻入到新合成的RNA探針中。

2. 雜交：標(biāo)記好的探針與目標(biāo)核酸序列特異性結(jié)合。

3. 檢測(cè)：

• 堿性磷酸酶：加入化學(xué)發(fā)光底物（如CSPD）或顯色底物（如NBT/BCIP），產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)。

• 熒光染料（如FITC）：用于熒光原位雜交，直接在熒光顯微鏡下觀察。

• 辣根過(guò)氧化物酶：也可用于化學(xué)發(fā)光或顯色檢測(cè)。

• 使用抗地高辛抗體（一抗）特異性識(shí)別并結(jié)合探針上的地高辛配基。

• 抗體上偶聯(lián)有報(bào)告分子，如：

主要優(yōu)勢(shì)

• 高靈敏度與特異性：抗地高辛抗體與地高辛配基的結(jié)合非常特異且緊密，背景噪聲低，檢測(cè)靈敏度高。

• 安全性：完全避免了使用放射性同位素（如32P、3?S）帶來(lái)的輻射危害和廢物處理難題。

• 穩(wěn)定性：地高辛標(biāo)記的探針可在 -20°C 下穩(wěn)定保存數(shù)年，而放射性探針會(huì)因衰變而失效。

• 多重檢測(cè)潛力：可以與其他標(biāo)記系統(tǒng)（如生物素、熒光直接標(biāo)記）結(jié)合，在同一份樣品中檢測(cè)多個(gè)靶標(biāo)。

總結(jié)

Digoxigenin-11-UTP 的核心作用是作為一種安全、高效的非放射性標(biāo)記物，用于制備地高辛標(biāo)記的RNA探針。這些探針廣泛應(yīng)用于需要高靈敏度核酸檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)中，特別是在原位雜交和Northern Blot領(lǐng)域，已成為分子病理學(xué)、發(fā)育生物學(xué)和基因表達(dá)研究中的金標(biāo)準(zhǔn)工具之一。