多胺氧化酶（Polyamine oxidase，PAO）試劑盒說明書
分光光度法 50管/48樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
多胺氧化酶是催化生物體內(nèi)多胺氧化的關鍵酶，通過調節(jié)體內(nèi)多胺水平和生成物的濃度，參與各種植物體對逆境脅迫的反應和生長發(fā)育過程。
測定原理：
PAO催化多胺氧化產(chǎn)生過氧化氫，在過氧化氫酶存在的條件下與底物顯色，在550nm下有特征吸收峰，通過測定吸光值增加速率來反映PAO活性。
組成：
產(chǎn)品名稱 | AO030-50T/48S | Storage |
試劑一：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 6ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 3ml | 4℃ |
試劑四：液體 | 3ml | 4℃ |
說明書 | 一份 |
自備儀器和用品：
分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
血清等液體：直接測定。
測定步驟：
分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至550nm，蒸餾水調零。
樣本測定
試劑名稱（μl） | 測定管 |
試劑一 | 700 |
試劑二 | 100 |
試劑三 | 50 |
樣本 | 100 |
試劑四 | 50 |
迅速混勻，于550nm下測定初始吸光值A1與30min后吸光值A2。ΔA=A2-A1。 |
PAO活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位定義：每mg組織蛋白在每ml反應體系中每分鐘A550變化0.002為一個酶活力單位。
PAO（U/mg prot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.002÷T =166.67×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位定義：每g組織在每ml反應體系中每分鐘A550變化0.002為一個酶活力單位。
PAO（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.002÷T =166.67×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位定義：每1萬個細菌或細胞在每ml反應體系中每分鐘A550變化0.002為一個酶活力單位。
PAO（U/104 cell）＝ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.002÷T =0.333×ΔA
按液體體積計算
單位的定義：每ml液體樣本在每ml反應體系中每分鐘A550變化0.002為一個酶活力單位。
PAO（U/ml）=ΔA×V反總÷V樣÷0.002÷T =166.67×ΔA
V反總：反應體系總體積，1×10-3 L；V樣：加入樣本體積，0.1 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
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關鍵字： 多胺氧化酶;多胺氧化酶(PAO);試劑盒;
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