乙酰膽堿酯酶(AchE)活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
AchE屬于絲氨酸水解酶,廣泛存在于各種動(dòng)物組織和血清中。AchE催化乙酰膽堿(Ach)水解,在神經(jīng)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)中起重要作用。
測(cè)定原理:
AchE催化Ach水解生成膽堿,膽堿與二硫?qū)ο趸郊姿幔―TNB)作用生成5-巰基-硝基苯甲酸(TNB);TNB在412nm處有吸收峰,通過(guò)測(cè)定412 nm吸光度增加速率,計(jì)算AchE活性。
粗酶液提取:
組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1ml試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清液待測(cè)。
細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
血清等液體:直接測(cè)定。
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