果糖激酶(FRK)測定試劑盒/微量法/96樣

測定意義：

蔗糖是大多數(shù)高等植物從源到庫運(yùn)輸?shù)闹饕问?/span>,  但進(jìn)入庫器官后被分解為果糖和葡萄糖,果糖在進(jìn)入下一步代謝前必須由果糖激酶或己糖激酶進(jìn)行磷酸化，以幫助庫組織的建立和庫強(qiáng)的提高。果糖激酶是催化果糖磷酸化的主要酶，還可以作為植物的己糖感受器和信號分子，通過影響植物的生長周期來調(diào)控植物的代謝和生長發(fā)育進(jìn)程，在庫組織中發(fā)揮重要的作用。因此，研究果糖激酶對研究植物中果糖代謝調(diào)節(jié)機(jī)制具有十分重要的意義。

測定原理：

FRK  催化果糖合成 6-磷酸果糖，6-磷酸果糖在磷酸己糖異構(gòu)酶的作用下異構(gòu)為 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化 6-磷酸葡萄糖脫氫生成 NADH ，NADH  在 340nm  有特征吸收峰。

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96  孔板、研缽、冰和蒸餾水。

測定步驟：

1 、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min   以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm。

2 、配好的試劑于 25℃預(yù)熱 10min。

3 、樣本測定

在 96  孔板中依次加入加入 50 μL  樣本、100 μL  試劑二，25 μL  試劑三，25 μL  試劑四，混勻，立即記錄340nm  處 30s  時(shí)的吸光值 A1  和 5min30s  后的吸光值 A2，計(jì)算 ΔA=A2-A1。

注 意：

若 ΔA  大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)?；?qū)⒎磻?yīng)時(shí)間縮短至2min，使 A2-A1  小于 0.5，可提高檢測靈敏度。