線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶(mt-GPD)活性試劑盒分光法/48樣
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶(mt-GPD) 存在于線粒體中，在3-磷酸甘油途徑中起重要作用， 催化底物3-磷酸甘油生成磷酸二羥丙酮，同時(shí)生成的電子和氫進(jìn)入呼吸鏈參與氧化磷酸化； 在電子傳遞體 (PMS) 存在下，使噻唑藍(lán) (MTT) 還原生成藍(lán)色產(chǎn)物，通過檢測(cè)該藍(lán)色產(chǎn) 物在550nm 處的增加速率，即可得出 mt-GPD 活性大小。
試劑盒組成和配制：
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存要求 | 備注 |
試劑一 | 液體60mL×1瓶 | 4℃保存 |
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試劑二 | 液體15mL×1瓶 | 4℃保存 |
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試劑三 | 液體0.5mL×1支 | 4℃保存 |
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試劑一 | 粉劑mg×2支 | 4℃保存 | 用前甩幾下使試劑落入底部，每支加1.2mL的蒸餾水溶解。一周內(nèi)用完。 |
試劑二 | 粉劑mg×4支 | -20℃保存 | 用前甩幾下使試劑落入底部，每支加0.6mL的蒸餾水溶解。一天內(nèi)用完。 |
試劑三 | 液體35mL×1瓶 | 4℃保存 |
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試劑四 | 粉劑mg×1支 | 4℃保存 | 用前甩幾下使試劑落入底部，臨用前加4.4mL蒸餾水溶解。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、石英比色皿(光徑1cm)、可調(diào)試移液器、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、研缽、冰和蒸餾水。
線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶(mtGPD)酶活性檢測(cè):
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取2個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)!
樣本制備：
(提示：整個(gè)線粒體的提取過程須保持4℃低溫環(huán)境):
①稱取約0 . 1g 組織或收集500萬細(xì)菌/細(xì)胞，加入1mL 試劑一，用冰浴勻漿器或研缽勻漿，轉(zhuǎn)移至離心管后于4℃×700g離心10min。
②棄沉淀，上清液移至另一離心管中，4℃×12000g 離 心 1 0min。用移液器移除上清液(上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的酶活性(此步可選做)),留下沉淀(沉淀
即為線粒體)。
③在沉淀(線粒體)中加入200μL試劑二和2 μL 試劑三，超聲波破碎(冰浴，功率20%或200W, 超聲3s, 間10秒，重復(fù)30次),液體置于冰上用于線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶
(mtGPD)活性測(cè)定。
[注]: 若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量 (g): 提取液體積(mL) 為1:5~10的比例進(jìn)行提取，或按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(104):提取液 (mL) 為500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。行提取)。
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