在眾多生物研究領(lǐng)域中,鈣含量測定都起著至關(guān)重要的作用。借助那些與 Ca2+ 結(jié)合后產(chǎn)生光譜響應(yīng)的熒光探針,研究人員能夠運(yùn)用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、熒光酶標(biāo)儀等儀器,對細(xì)胞內(nèi)游離 Ca2+ 濃度的變化情況展開研究。
Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM 是在活細(xì)胞鈣成像研究里最為常用的可見光可激發(fā)鈣指示劑。不過,這兩種指示劑存在一定局限性。它們在經(jīng)過酯酶水解后,于活細(xì)胞中僅能呈現(xiàn)出中等強(qiáng)度的熒光。而且,為了使細(xì)胞鈣反應(yīng)達(dá)到最佳效果,需要較為苛刻的細(xì)胞加載條件。Fluo-20 AM 染料的出現(xiàn)便可有效解決上述問題,它在保持與 Fluo-3 AM、Fluo-4 AM 和 Fluo-8 AM 相似且便于使用的光譜波長(Ex/Em = 495/516 nm)的同時,顯著改善了細(xì)胞負(fù)載情況以及鈣反應(yīng)效果。例如,F(xiàn)luo-20 AM 可以在室溫條件下完成細(xì)胞上樣,而 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM 則必須在 37℃ 的環(huán)境中才能進(jìn)行細(xì)胞上樣操作。不僅如此,F(xiàn)luo-20 AM 亮度是 Fluo-4 AM 的 4 倍、Fluo-3 AM 的 8 倍、Fluo-8 AM 的 2 倍。輕松檢測微弱鈣離子濃度變化,減少背景干擾,尤其適合原代細(xì)胞、低鈣響應(yīng)細(xì)胞等信號較弱的場景。Fluo-20 AM 是一種乙酰甲酯衍生物,具有細(xì)胞膜滲透性,只需簡單培養(yǎng),即可輕易進(jìn)入細(xì)胞,一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)即被其內(nèi)酯酶剪切生成不具膜滲透性的 Fluo-20,從而滯留在胞內(nèi)以發(fā)揮相應(yīng)生理功能。綜上所述,F(xiàn)luo-20 AM 是 Fluo-3 AM、Fluo-4 AM 和 Fluo-8 AM 的完美替代品。
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