羅漢果探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱(chēng) | 羅漢果探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Fructus Momordicae Probe-based PCR Identification Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR5047 |
技術(shù)原理
基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）探針?lè)夹g(shù)：
探針設(shè)計(jì)：5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)（如FAM），3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，通過(guò)Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探針，釋放熒光信號(hào)。
定量分析：通過(guò)檢測(cè)擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)的增長(zhǎng)（Ct值），實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)RNA/DNA的定量或定性分析。
三步流程：
反轉(zhuǎn)錄（若檢測(cè)RNA）：將RNA模板逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。
擴(kuò)增：PCR循環(huán)擴(kuò)增目標(biāo)序列。
檢測(cè)：實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)。
產(chǎn)品組成
| 成分 | 規(guī)格/包裝量 |
| 探針?lè)╭RT-PCR緩沖液 | 500 μL |
| 探針?lè)╭RT-PCR酶混合液| 100 μL |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL |
| 羅漢果探針?lè)ㄒ锘旌弦?| 100 μL |
| 羅漢果qRT-PCR探針 | 50 μL |
| 陽(yáng)性對(duì)照（1×10?拷貝/μL） | 50 μL |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備（定量分析需6個(gè)稀釋梯度）
使用陽(yáng)性對(duì)照按10倍梯度稀釋?zhuān)?02~10?拷貝/μL），冰上操作避免污染。
2. 樣品RNA提取
推薦使用兼容的RNA提取試劑盒，設(shè)置陰性/陽(yáng)性對(duì)照（N+2樣本）。
3. qRT-PCR反應(yīng)體系（20μL）
| 成分 | 樣品管（μL） | 陰性對(duì)照（μL） | 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)管（μL） |
| qRT-PCR緩沖液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探針 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| RNA模板/稀釋液 | 5 | - | 5（對(duì)應(yīng)梯度） |
| 超純水 | - | 5 | - |
4. 反應(yīng)程序
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30分鐘
預(yù)變性：94℃ 10分鐘
PCR循環(huán)（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（采集FAM通道信號(hào)）
數(shù)據(jù)分析
定量：以標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣品濃度。
定性：
陰性：Ct≥40或無(wú)擴(kuò)增曲線(xiàn)。
陽(yáng)性：Ct≤35且曲線(xiàn)呈指數(shù)增長(zhǎng)。
可疑（35<Ct<40）：需重復(fù)檢測(cè)確認(rèn)。
注意事項(xiàng)
操作需在獨(dú)立潔凈區(qū)域，避免交叉污染。
陽(yáng)性對(duì)照需最后加入，防止氣溶膠污染。
試劑解凍后需充分混勻，短暫離心后使用。
本產(chǎn)品僅限科研使用，不適用于臨床診斷。
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