合歡皮探針法PCR鑒定試劑盒
商品屬性
產品名稱 | 合歡皮探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Cortex Albiziae Probe-based PCR Identification Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5100 |
檢測原理
采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術：
針對合歡皮高度保守的基因組DNA序列設計特異性引物和熒光探針
探針5'端標記FAM熒光基團，3'端標記淬滅基團，PCR擴增過程中Taq酶切割探針釋放熒光信號
實時監(jiān)測熒光信號強度，通過Ct值判斷樣本中是否存在合歡皮DNA
可用于定性和定量檢測：定性檢測用于藥材真?zhèn)舞b別，定量檢測用于混偽品含量分析
關鍵性能指標
特異性：引物和探針針對合歡皮高度保守區(qū)設計，不會與其他植物DNA發(fā)生交叉反應，如合歡花、苦楝皮等易混藥材
靈敏度：最低檢測限可達100拷貝/μL，可檢測低至0.1ng的合歡皮DNA
檢測時間：從DNA提取到出具報告僅需2-3小時
線性范圍：102-10?拷貝/μL，可用于定量分析混偽品含量
重復性：批內、批間變異系數(shù)均＜5%
防污染體系：含UNG酶-dUTP系統(tǒng)，有效防止PCR產物交叉污染
臨床應用場景
適用人群
中藥材生產企業(yè)：合歡皮藥材真?zhèn)舞b別，原料質量控制
藥品監(jiān)管部門：中藥材市場監(jiān)管，打擊假冒偽劣產品
科研機構：中藥材分子鑒定方法研究，中藥資源保護
醫(yī)院藥房：中藥飲片質量控制，保障臨床用藥安全
臨床價值
快速鑒定：比傳統(tǒng)形態(tài)學、顯微鑒定方法更快速、準確
早期鑒別：可在藥材加工前進行鑒別，避免經濟損失
微量檢測：可檢測微量樣品，如粉末、炮制品等
定量分析：可定量檢測混偽品含量，評估藥材質量
標準化：建立標準化的分子鑒定方法，提高中藥材鑒定的準確性和可靠性
產品組成
| 成分 | 規(guī)格 | 主要功能 |
| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 500μL | 提供反應體系基礎環(huán)境 |
| 探針法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆轉錄酶及熱啟動DNA聚合酶 |
| 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1 mL | 標準品稀釋及樣本處理 |
| 合歡皮qRT-PCR引物混合液 | 100μL | 特異性擴增目標序列 |
| 合歡皮qRT-PCR探針 | 50μL | FAM通道熒光信號標記 |
| 陽性對照（1×10?拷貝/μL） | 50μL | 標準曲線建立及質控 |
| 說明書 | 1份 | 操作指南 |
自備試劑：待測樣本RNA（推薦使用柱式提取法純化）。
儲存及運輸
儲存條件：-20℃避光保存，有效期12個月。
運輸條件：低溫干冰運輸。
實驗步驟
1. 標準曲線制備
使用陽性對照進行10倍梯度稀釋（102~10?拷貝/μL），標記6管（2~7號），每管加入5μL上一步稀釋液至45μL稀釋液，冰上操作以避免污染。
2. RNA樣本制備
建議設置N+2個樣本（含陰/陽性對照），使用兼容的RNA提取試劑盒純化，陰性對照以水替代模板。
3. qRT-PCR反應體系（20μL）
| 成分 | 樣本管 | 陰性對照 | 標準曲線管 |
| PCR緩沖液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探針 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 模板RNA | 5μL | - | - |
| 標準品 | - | - | 5μL |
| 超純水 | - | 5μL | - |
4. 反應程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 |
| 逆轉錄 | 50℃ | 30 min |
| 預變性 | 94℃ | 10 min |
| 40循環(huán) | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號） |
數(shù)據(jù)分析
定量分析：以標準品log濃度為橫軸、Ct值為縱軸繪制曲線，計算樣本拷貝數(shù)。
定性分析：陰性對照Ct≥40，陽性對照需有顯著熒光信號。
注意事項
分區(qū)操作（樣本處理、試劑配制、擴增區(qū)），避免交叉污染。
探針避光保存，反復凍融不超過3次。
本試劑盒陽性對照為無傳染性DNA片段，不可替代臨床標準品。
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關鍵字： 合歡皮;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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