技術(shù)原理
采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術(shù)：
探針設計：針對秦皮保守基因序列設計特異性引物及探針，探針5'端標記熒光報告基團（如FAM），3'端標記淬滅基團。
信號檢測：PCR擴增時，Taq酶切割探針釋放熒光信號，通過實時監(jiān)測熒光強度實現(xiàn)靶序列的定量分析。
高特異性：引物與探針經(jīng)優(yōu)化，避免與其他病原體交叉反應。
用途：科研用途，用于秦皮核酸的定性或定量檢測，不可用于臨床診斷。
產(chǎn)品名稱 | 秦皮探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Cortex Fraxini Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR5007 |
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格/功能 |
| qPCR緩沖液 | 500μL（提供反應體系基礎環(huán)境） |
| 酶混合液 | 100μL（含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA聚合酶）|
| 引物混合液 | 100μL（特異性擴增秦皮靶序列） |
| TaqMan探針 | 50μL（標記熒光基團） |
| 陽性對照（1×10?拷貝/μL） | 50μL（人工合成DNA標準品） |
| 模板稀釋液 | 1 mL（用于標準曲線制備） |
操作步驟
1. 標準曲線制備（定量分析需執(zhí)行）
將陽性對照按10倍梯度稀釋（102~10?拷貝/μL），每個梯度單獨使用帶濾芯槍頭操作，避免污染。
2. 樣本處理
使用商品化RNA/DNA提取試劑盒制備模板，建議設置陰性對照（超純水）和陽性對照（試劑盒提供）。
3. PCR反應體系（20μL）
| 成分 | 體積 |
| qPCR緩沖液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 引物混合液 | 2μL |
| TaqMan探針 | 1μL |
| 模板RNA/DNA | 5μL |
4. 擴增程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 熒光采集 |
| 逆轉(zhuǎn)錄（若需） | 50℃ | 30 min | 否 |
| 預變性 | 94℃ | 10 min | 否 |
| 擴增（40循環(huán)） | 94℃ | 15 sec | 否 |
| | 60℃ | 1 min | FAM通道 |
結(jié)果判讀
定量分析：以標準曲線Ct值計算樣本拷貝數(shù)。
定性分析：
陽性：Ct值≤35，且擴增曲線呈S型；
陰性：Ct值≥40或無擴增曲線。
注意事項
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴增需在獨立區(qū)域進行，避免氣溶膠污染。
防污染措施：使用濾芯吸頭、定期清潔臺面（10%次氯酸或75%乙醇）。
質(zhì)量控制：每批次實驗需包含陰/陽性對照。
凍存要求：避免反復凍融（≤7次），分裝保存。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀（如ABI 7500、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler等）。
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關(guān)鍵字： 秦皮;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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