廣藿香探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 廣藿香探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Herba Pogostemonis Probe-based PCR Identification Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR5107 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒基于探針?lè)晒舛?/span>PCR技術(shù)，專用于廣藿香（Pogostemon cablin）的快速、高特異性核酸鑒定。適用于科研領(lǐng)域，可實(shí)現(xiàn)對(duì)廣藿香RNA的定性或定量分析，具有高靈敏度和低交叉反應(yīng)性。
技術(shù)原理
采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，通過(guò)5'核酸外切酶活性的Taq酶切割探針，釋放熒光信號(hào)（FAM通道）。探針與廣藿香高度保守序列特異性結(jié)合，避免與其他RNA交叉反應(yīng)。
試劑盒組成
探針?lè)?/span>qRT-PCR緩沖液（500μL）
酶混合液（100μL，含逆轉(zhuǎn)錄酶及Taq酶）
熒光PCR模板稀釋液（1mL）
廣藿香特異性引物及探針混合液（100μL）
陽(yáng)性對(duì)照（1×10^8拷貝/μL，50μL）
說(shuō)明書(shū)（1份）
實(shí)驗(yàn)步驟
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
將陽(yáng)性對(duì)照按10倍梯度稀釋（10^2~10^7拷貝/μL），獨(dú)立操作避免污染。
標(biāo)記離心管（7~2號(hào)），依次加入稀釋液與陽(yáng)性對(duì)照，渦旋混勻。
樣本RNA提取
使用兼容的RNA提取試劑盒，建議設(shè)置陰性對(duì)照（水）和陽(yáng)性對(duì)照（稀釋陽(yáng)性模板）。
PCR反應(yīng)體系（20μL）
| 成分 | 樣品管（μL） | 陰性對(duì)照（μL） | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管（μL） |
| qRT-PCR緩沖液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探針 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 樣本RNA | 5 | - | - |
| 超純水 | - | 5 | - |
| 標(biāo)準(zhǔn)曲線稀釋液 | - | - | 5（對(duì)應(yīng)梯度） |
擴(kuò)增程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |
| 擴(kuò)增（40循環(huán)） | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（熒光采集） |
數(shù)據(jù)分析
定量檢測(cè)：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸，Ct值為縱軸，計(jì)算樣本濃度。
定性檢測(cè)：
陰性對(duì)照Ct≥40；陽(yáng)性對(duì)照Ct≤30且擴(kuò)增曲線典型。
樣本Ct≤35為陽(yáng)性；≥40為陰性；35~40需復(fù)測(cè)。
注意事項(xiàng)
僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
操作需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，避免RNA降解。
不同批次試劑避免混用。
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