產(chǎn)品概述
本試劑盒采用探針法實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)，專用于佩蘭（Herba eupatorii）的特異性鑒定。通過設(shè)計(jì)保守區(qū)引物及熒光探針，實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)DNA的高靈敏度、高特異性擴(kuò)增檢測，適用于科研領(lǐng)域的物種鑒定、基因表達(dá)分析等。
產(chǎn)品名稱 | 佩蘭探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Herba Eupatorii Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR5020 |
實(shí)驗(yàn)原理
探針法qPCR：在PCR體系中加入熒光標(biāo)記探針，探針與目標(biāo)DNA結(jié)合后釋放熒光信號，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光強(qiáng)度定量分析模板濃度。
三步擴(kuò)增：
變性：94℃使DNA雙鏈解離為單鏈。
退火：55℃下引物與模板特異性結(jié)合。
延伸：72℃時(shí)Taq酶沿模板合成新鏈，探針?biāo)忉尫艧晒庑盘枴?/span>
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格 | 用途說明 |
| PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（紅蓋） | 含dNTPs、Taq酶、緩沖液等 |
| 引物混合液 | 100 μL（白蓋）| 特異性引物及探針 |
| 陽性對照（1×10?/μL）| 50 μL（黃蓋）| 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)有效性 |
| 超純水 | 1 mL | 陰性對照及稀釋模板 |
操作步驟
1. 樣本制備
DNA提?。菏褂眉嫒莸暮怂崽崛≡噭ㄈ缰讲《綝NAout），制備待測樣本DNA（建議濃度≥10 ng/μL）。
對照設(shè)置：需包括陽性對照（試劑盒提供）和陰性對照（超純水）。
2. PCR反應(yīng)體系（40 μL）
| 組分 | 體積（μL） |
| PCR MagicMix 3.0 | 20 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 18 |
循環(huán)條件：
預(yù)變性：95℃ 5 min
35循環(huán)：95℃ 30 sec → 55℃ 30 sec → 72℃ 40 sec（熒光采集）
終延伸：72℃ 7 min
3. 結(jié)果分析
陽性判定：擴(kuò)增曲線呈“S”形且Ct值≤35。
陰性對照：無擴(kuò)增曲線。
電泳驗(yàn)證：陽性對照需出現(xiàn)551 bp條帶（可選）。
注意事項(xiàng)
樣本要求：避免使用降解DNA或RNA樣本，推薦保存于液氮、Trizol或-80℃。
污染防控：陽性對照單獨(dú)存放，操作分區(qū)（樣本制備/PCR/產(chǎn)物分析）。
重復(fù)實(shí)驗(yàn)：若樣本無擴(kuò)增，可稀釋10倍后復(fù)測以排除抑制劑干擾。
技術(shù)參數(shù)
特異性：僅擴(kuò)增佩蘭目標(biāo)序列，無交叉反應(yīng)。
靈敏度：檢測下限≤10 copies/μL。
應(yīng)用范圍：科研用途（非臨床診斷）。
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關(guān)鍵字： 佩蘭;探針法;PCR試劑盒;PCR鑒定試劑盒;
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