鼠附紅細(xì)胞體（鼠嗜血支原體）探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 鼠附紅細(xì)胞體（鼠嗜血支原體）探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒 | 英文名稱 | Eperythrozoon coccoides Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR5255 |
預(yù)期用途
本試劑盒基于探針?lè)晒舛?/span>PCR技術(shù)，專用于檢測(cè)鼠附紅細(xì)胞體（鼠嗜血支原體）核酸，適用于科研領(lǐng)域?qū)Ω腥緲颖镜亩ㄐ曰蚨糠治?，不適用于臨床診斷。
檢驗(yàn)原理
采用TaqMan探針技術(shù)，針對(duì)病原體基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物及探針。通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程中的熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)核酸的高靈敏、高特異性檢測(cè)。分析靈敏度可達(dá)100拷貝/反應(yīng)，線性范圍覆蓋5個(gè)數(shù)量級(jí)。
試劑組成
擴(kuò)增液（25μL/管）
反應(yīng)液（975μL/管）
陽(yáng)性質(zhì)控品（人工合成DNA片段，50μL/管）
陰性質(zhì)控品（50μL/管）
說(shuō)明書(shū)
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融（≤7次）。
有效期：12個(gè)月。
運(yùn)輸：低溫（-20℃）泡沫箱加冰密封運(yùn)輸。
適用儀器
兼容ABI系列、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等熒光定量PCR儀。
樣本要求
樣本類型：全血、血清、組織（腸道等）、拭子或病毒培養(yǎng)物。
保存與運(yùn)輸：短期-20℃保存，長(zhǎng)期需-70℃；運(yùn)輸時(shí)使用2~8℃冰袋。
實(shí)驗(yàn)步驟
核酸提取：推薦使用商品化DNA提取試劑盒，避免交叉污染。
試劑配制：
反應(yīng)體系（20μL/管）：19.5μL反應(yīng)液 + 0.5μL擴(kuò)增液 + 5μL模板DNA。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：6個(gè)10倍梯度稀釋的陽(yáng)性質(zhì)控品（10^1~10^6拷貝/μL）。
PCR擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 3分鐘；
40個(gè)循環(huán)：95℃ 15秒 → 55℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）。
結(jié)果判讀
陽(yáng)性：Ct值≤35且擴(kuò)增曲線典型。
可疑：35<Ct≤38，需復(fù)測(cè)確認(rèn)。
陰性：無(wú)Ct值或Ct>38。
質(zhì)控要求：陰性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增；陽(yáng)性對(duì)照Ct≤30。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作（試劑配制、樣本處理、擴(kuò)增區(qū)），避免污染。
使用濾芯吸頭及無(wú)核酸酶耗材。
反應(yīng)液避光保存，避免氣泡干擾。
實(shí)驗(yàn)后需用10%次氯酸或75%酒精清潔工作臺(tái)。
性能指標(biāo)
靈敏度：100拷貝/反應(yīng)。
特異性：與常見(jiàn)病原體無(wú)交叉反應(yīng)。
精密度：批內(nèi)/批間CV≤3%。
局限性
檢測(cè)結(jié)果受樣本質(zhì)量、提取方法及操作規(guī)范影響。
基因變異可能導(dǎo)致假陰性。
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