海鷗彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 海鷗彎曲桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Campylobacter lari Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR5259 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒專用于海鷗彎曲桿菌（Campylobacter laridis）的快速、精準(zhǔn)檢測，采用探針法熒光定量PCR技術(shù)（TaqMan探針），通過特異性引物和熒光標(biāo)記探針靶向病原體保守基因序列（如16S rRNA或毒力基因），實(shí)現(xiàn)高靈敏度、高特異性的定性和定量檢測。適用于臨床診斷、食品安全及環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。
技術(shù)參數(shù)
檢測原理：基于TaqMan探針技術(shù)，實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增過程中釋放的熒光信號(hào)（FAM通道），通過Ct值定量目標(biāo)DNA。
靈敏度：100–500拷貝/反應(yīng)。
線性范圍：102–10?拷貝/μL（覆蓋5個(gè)數(shù)量級(jí)）。
特異性：與空腸彎曲桿菌等近緣種無交叉反應(yīng)。
防污染設(shè)計(jì)：閉管操作，含陰性對(duì)照及專用稀釋液。
試劑盒組分
| 組分 | 規(guī)格 | 功能說明 |
| 2×qPCR預(yù)混液 | 500 μL | 含DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液 |
| 引物混合液 | 100 μL | 特異性擴(kuò)增目標(biāo)基因 |
| TaqMan探針 | 50 μL | FAM標(biāo)記，靶向保守序列 |
| 陽性對(duì)照（1×10?拷貝/μL）| 50 μL | 重組質(zhì)粒DNA，用于標(biāo)準(zhǔn)曲線 |
| 陰性對(duì)照 | 50 μL | 無菌水，監(jiān)控污染 |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL | 樣本及對(duì)照梯度稀釋 |
操作流程
1. 樣本制備
提取樣本DNA（推薦商品化提取試劑盒），濃度建議≤100 ng/μL。
陽性對(duì)照稀釋：按10倍梯度稀釋至102–10?拷貝/μL（需獨(dú)立操作區(qū)，避免污染）。
2. PCR反應(yīng)體系（20 μL）
2×qPCR預(yù)混液：10 μL
引物混合液：2 μL
探針：1 μL
模板DNA：2 μL
無菌水：補(bǔ)至20 μL
3. 擴(kuò)增程序
| 步驟 | 溫度/時(shí)間 | 循環(huán)次數(shù) |
| 預(yù)變性 | 95℃ 5 min | 1 |
| 擴(kuò)增 | 95℃ 15 sec → 60℃ 45 sec（采集熒光） | 40 |
4. 適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI 7500/7900、StepOnePlus
Bio-Rad CFX系列
Roche LightCycler
結(jié)果判讀
陽性：Ct值≤35，擴(kuò)增曲線呈S型。
陰性：Ct值≥40或無擴(kuò)增。
灰區(qū)樣本：Ct值35–40需復(fù)檢。
定量分析：以陽性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本載量。
質(zhì)控要求
陽性對(duì)照：Ct值≤30。
陰性對(duì)照：無擴(kuò)增信號(hào)（Ct值≥40）。
注意事項(xiàng)
防污染措施：
嚴(yán)格分區(qū)操作（試劑配制、樣本處理、擴(kuò)增區(qū)）。
使用帶濾芯槍頭，避免交叉污染。
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融（有效期12個(gè)月）。
生物安全：樣本處理需在生物安全柜中進(jìn)行，廢棄物高壓滅菌。
應(yīng)用場景
臨床診斷：腹瀉病原體快速篩查。
食品安全：畜禽產(chǎn)品（雞肉、豬肉）污染監(jiān)測。
環(huán)境監(jiān)測：水源或養(yǎng)殖場病原體檢測。
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關(guān)鍵字： 海鷗彎曲桿菌;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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