檢測原理
基于實時熒光定量PCR（qPCR）探針法技術(shù)：
探針設(shè)計：5'端標(biāo)記熒光報告基團（如FAM），3'端標(biāo)記淬滅基團。當(dāng)探針完整時，熒光信號被淬滅；PCR擴增時，Taq酶切割探針，釋放熒光信號。
定量分析：通過監(jiān)測熒光強度增長（Ct值）實現(xiàn)靶基因的定量或定性檢測。
產(chǎn)品名稱 | 地黃探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Radix Rehmanniae Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR5140 |
產(chǎn)品組成
| 編號 | 成分 | 規(guī)格 |
| 試劑一 | 探針法qRT-PCR緩沖液 | 500μL |
| 試劑二 | 探針法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| 試劑三 | 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1 mL |
| 試劑四 | 地黃探針法qRT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 試劑五 | 地黃qRT-PCR探針 | 50μL |
| 試劑六 | 陽性對照（1×10?拷貝/μL） | 50μL |
| 其他 | 說明書 | 1份 |
產(chǎn)品特點
高特異性：引物及探針針對地黃保守基因序列設(shè)計，避免交叉反應(yīng)。
高靈敏度：最低檢測限可達102拷貝/μL。
即開即用：用戶僅需提供樣品RNA模板。
內(nèi)控設(shè)計：含陽性對照，可區(qū)分假陰性結(jié)果。
適用范圍：僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（6個梯度稀釋，102~10?拷貝/μL）：
使用陽性對照按10倍梯度稀釋，避免交叉污染。
2. 樣品RNA提?。?/span>
推薦使用柱式RNA提取試劑盒，或兼容的其他方法。
3. qPCR反應(yīng)體系（20μL）：
| 成分 | 體積（μL） |
| 探針法緩沖液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 地黃探針 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 樣品RNA/標(biāo)準(zhǔn)品/陰性對照 | 5 |
4. 反應(yīng)程序：
| 步驟 | 溫度 | 時間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |
| 擴增（40循環(huán)） | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（采集熒光） |
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計算樣品濃度。
定性檢測：
陽性：Ct≤35，擴增曲線呈典型S型。
陰性：Ct≥40。
可疑（35<Ct<40）：需重復(fù)檢測。
注意事項
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
防污染措施：分區(qū)操作（樣品制備區(qū)、擴增區(qū)），使用帶濾芯槍頭。
質(zhì)量控制：每批次實驗需包含陰性對照（無模板）和陽性對照。
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關(guān)鍵字： 地黃;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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