六種致瀉大腸桿菌六重探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 六種致瀉大腸桿菌六重探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒 | 英文名稱 | Six Species of Diarrheagenic Escherichia coli Six-plex Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR5279 |
預(yù)期用途
本試劑盒用于檢測(cè)六種致瀉大腸桿菌的核酸，適用于科研場(chǎng)景下的輔助診斷，結(jié)果需結(jié)合其他臨床指標(biāo)綜合判斷。不可用于臨床診斷或治療。
檢驗(yàn)原理
采用TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)六種致瀉大腸桿菌的保守基因區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針，通過(guò)熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程，實(shí)現(xiàn)核酸的定性和定量分析。
試劑組成
| 組分名稱 | 規(guī)格 |
| 六種致瀉大腸桿菌擴(kuò)增液 | 25μL×1管 |
| 六種致瀉大腸桿菌反應(yīng)液 | 975μL×1管 |
| 陽(yáng)性質(zhì)控品 | 50μL×1管（人工合成DNA片段） |
| 陰性質(zhì)控品 | 50μL×1管 |
| 說(shuō)明書 | 1份 |
注意：不同批號(hào)試劑不可混用。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃±5℃避光保存，避免反復(fù)凍融（≤7次）。
有效期：12個(gè)月。
運(yùn)輸：低溫冰袋（2~8℃）。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI系列（如7500、StepOnePlus）
MX3000P/3005P
LightCycler（Roche）
Bio-Rad（CFX系列）
Eppendorf Mastercycler
需自備耗材：無(wú)核酸酶離心管、濾芯吸頭、移液器等。
樣本要求
樣本類型：糞便、全血、血清、拭子（咽喉/肛門）、呼吸道分泌物等。
處理要求：
避免交叉污染，采集后立即檢測(cè)或-20℃短期保存（長(zhǎng)期需-70℃）。
推薦使用配套核酸提取試劑盒（如Hypure病毒基因組DNA提取試劑盒）。
操作步驟
DNA提取：按標(biāo)準(zhǔn)方法提取樣本核酸，建議使用商品化試劑盒。
試劑配制：
反應(yīng)體系：19.5μL反應(yīng)液 + 0.5μL擴(kuò)增液/孔。
分裝后加入5μL模板（樣本/陰陽(yáng)對(duì)照）。
PCR擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 3分鐘（1循環(huán)）。
擴(kuò)增：95℃ 15秒 → 55℃ 30秒（40循環(huán)），不采集熒光。
結(jié)果判讀：
陽(yáng)性：Ct≤35，指數(shù)擴(kuò)增曲線。
可疑：35<Ct≤38，需復(fù)檢。
陰性：無(wú)Ct值或Ct>38。
性能指標(biāo)
靈敏度：1.0×103 copies/mL。
特異性：與相近菌株無(wú)交叉反應(yīng)。
精密度：批內(nèi)/批間CV≤3%。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作（試劑配制、樣本處理、擴(kuò)增），避免污染。
反應(yīng)液避光保存，使用前充分混勻離心。
陽(yáng)性對(duì)照需單獨(dú)存放，防止污染其他組分。
失效或異常結(jié)果可能源于樣本保存不當(dāng)、提取效率低或儀器校準(zhǔn)問(wèn)題。
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