致瀉性大腸桿菌（致瀉性大腸埃希氏菌）通用探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 致瀉性大腸桿菌（致瀉性大腸埃希氏菌）通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Diarrheagenic Escherichia coli Universal Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5283 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用TaqMan探針法熒光定量PCR技術，專為快速、靈敏檢測致瀉性大腸桿菌（致瀉性大腸埃希氏菌）而設計。該產(chǎn)品通過特異性引物和探針組合，可準確識別目標病原體，適用于多種樣本類型的檢測。
產(chǎn)品特點
高靈敏度：優(yōu)化的引物和探針設計，檢測限可達102-10?拷貝/μL
操作簡便：即開即用型試劑，用戶只需提供樣品模板
特異性強：針對高度保守區(qū)設計，避免與其他微生物發(fā)生交叉反應
質(zhì)量控制：提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性結果
閉管檢測：減少污染風險，提高實驗安全性
高通量：50次20μL體系反應，滿足批量檢測需求
技術參數(shù)
規(guī)格：50T/盒
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個月
運輸條件：低溫運輸
適用儀器：兼容主流熒光定量PCR儀
檢測原理
基于TaqMan探針技術，在PCR擴增過程中，探針與目標序列特異性結合后被Taq酶切割，釋放熒光信號。通過實時監(jiān)測熒光強度變化，實現(xiàn)對目標DNA的定量檢測。
適用范圍
食品安全檢測（肉制品、生鮮蔬菜、乳制品等）
臨床腹瀉病原體篩查
水質(zhì)衛(wèi)生監(jiān)測
食源性疾病爆發(fā)調(diào)查
進出口食品檢驗檢疫
樣本處理
樣本類型
食品樣品：按《食品衛(wèi)生微生物學檢驗》要求采集與預培養(yǎng)
血液樣品：無菌采集靜脈血2mL，EDTA抗凝
糞便樣品：取新鮮樣本置于滅菌收集管
病灶樣本：采集新鮮滲出物或粘液膿血
核酸提取
建議使用專業(yè)核酸提取試劑盒，提取后應盡快檢測或-80℃保存
實驗操作
試劑準備
將所有組分解凍后充分混勻，短暫離心
按反應數(shù)配制預混液（避免反復凍融）
陽性對照稀釋
準備6個稀釋管，分別標記7-2號
每管加入45μL專用稀釋液
梯度稀釋陽性對照（10E2-10E7拷貝/μL）：
7號管：5μL原液→10E7拷貝/μL
依次稀釋至2號管（10E2拷貝/μL）
PCR反應體系
推薦反應體積：20μL
反應程序：
預變性：95℃ 3分鐘
擴增循環(huán)：95℃ 15秒，60℃ 1分鐘（45個循環(huán)）
結果分析
設置閾值線在指數(shù)擴增期
標準曲線法定量：以Ct值與log拷貝數(shù)繪制標準曲線
結果判讀：
陽性：Ct值≤35且有典型擴增曲線
可疑：35<Ct值<40，建議重復檢測
陰性：無擴增信號或Ct值≥40
注意事項
實驗分區(qū)操作：試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)嚴格分離
使用帶濾芯槍頭，避免交叉污染
陽性對照稀釋需在獨立區(qū)域進行
本產(chǎn)品僅限科研用途
避免反復凍融試劑，影響檢測性能
質(zhì)量控制
每批實驗應包含：
陰性對照（無模板對照）
陽性對照（各梯度稀釋）
內(nèi)參對照（如適用）
標準曲線相關系數(shù)R2應≥0.98
擴增效率應在90-110%之間
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關鍵字： 致瀉性大腸桿菌（致瀉性大腸埃希氏菌）通用;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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