歐洲放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產品名稱 | 歐洲放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Actinomyces europaeus Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5288 |
檢測原理
采用TaqMan探針法，探針5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。PCR擴增時，Taq DNA聚合酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號，熒光強度與擴增產物量成正比，實現(xiàn)定量檢測。
產品特點
高靈敏度：優(yōu)化引物與探針，檢測限低至102拷貝/μL。
高特異性：針對Actinomyces europaeus保守序列設計，無交叉反應。
即開即用：預混反應液（含酶、dNTPs、緩沖液等），僅需添加模板DNA。
內控對照：提供無傳染性的DN段作為陽性對照，避免假陰性。
適用范圍：科研用途，適用于血清、血漿、組織勻漿、細菌培養(yǎng)物等樣本。
操作流程
樣本制備
DNA提取：
血清/血漿：3000 rpm離心10-30分鐘，避免反復凍融。
組織勻漿：生理鹽水勻漿后離心取上清。
細菌樣本：推薦使用柱式DNA提取試劑盒。
DNA保存：分裝后-20℃凍存，避免反復凍融。
標準曲線制備（以102~10?拷貝/μL梯度為例）
標記6管，分別加入45 μL稀釋液（DEPC-H?O或專用緩沖液）。
取5 μL陽性對照（10?拷貝/μL）加入第1管，梯度稀釋至10?~102拷貝/μL，每步震蕩混勻。
各濃度取5 μL進行qPCR，每個梯度重復3次。
qPCR反應體系
| 組分 | 體積（μL） |
| 預混Master Mix | 10 |
| 引物/探針混合液 | 2 |
| 模板DNA | 5 |
| DEPC-H?O | 至20 |
反應條件
預變性：95℃ 5分鐘
循環(huán)：95℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（45循環(huán)，熒光采集）
注意事項
分區(qū)操作：樣本制備、試劑配制、擴增需在獨立區(qū)域進行，避免污染。
陽性對照處理：稀釋需在專用區(qū)域完成，嚴禁接觸其他組分。
數(shù)據(jù)判讀：Ct值＞35需重復檢測，標準曲線R2≥0.98方有效。
儀器校準：定期校驗熒光通道靈敏度。
質量控制
陰性對照：DEPC-H?O替代模板，應無擴增曲線。
重復性：同一樣本Ct值變異系數(shù)（CV）＜5%。
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關鍵字： 歐洲放線菌;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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