產(chǎn)品概述
本試劑盒基于探針法熒光定量PCR技術，專用于車前草（Plantago spp.）的快速、高特異性核酸鑒定，適用于科研場景下的定性或定量分析。試劑盒包含優(yōu)化的引物探針組合、陽性對照及預混反應體系，靈敏度高（檢測下限達10^1拷貝/μL），線性范圍覆蓋5個數(shù)量級，可有效區(qū)分假陰性結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | 車前草探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Herba Plantaginis Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR5172 |
包裝規(guī)格
試劑一：探針法qPCR緩沖液（500 μL）
試劑二：探針法qPCR酶混合液（50 μL）
試劑三：熒光PCR專用模板稀釋液（1 mL）
試劑四：PCR引物-探針干粉（50次反應）
試劑五：PCR陽性對照（10^7拷貝/μL，50 μL）
操作流程
1. 標準曲線制備
使用陽性對照（10^7拷貝/μL）進行10倍梯度稀釋（10^1–10^6拷貝/μL），獨立操作以避免污染。
標記離心管（1–6號），依次加入稀釋液并混勻，冰上保存?zhèn)溆谩?/span>
2. 樣品DNA提取
建議設置陰性對照（NC）和陽性對照（PC），PC為陽性對照的1000倍稀釋液。
兼容多數(shù)商業(yè)DNA提取試劑盒，需確保模板純度。
3. qPCR反應體系（20 μL）
樣品管：10 μL緩沖液 + 2 μL酶混合液 + 1 μL探針 + 2 μL引物 + 5 μL模板。
陰性對照：以超純水替代模板。
標準曲線管：加入對應梯度稀釋液5 μL。
4. 反應程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |
| 預變性 | 94℃ | 10 min |
| 40循環(huán)擴增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號） |
5. 數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標準曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計算樣品濃度。
定性檢測：Ct≤39為陽性，≥40為陰性；39–40需復測。
注意事項
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)域進行，避免交叉污染。
質(zhì)量控制：陰性對照Ct≥40，陽性對照需有典型擴增曲線（Ct≤39）。
防污染措施：使用帶濾芯槍頭，實驗后以10%次氯酸或75%酒精消毒臺面。
保存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期12個月。
局限性聲明
檢測結(jié)果受樣本采集、保存及提取方法影響。
基因突變或試劑運輸不當可能導致假陰性/假陽性。
僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
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關鍵字： 車前草;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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