哺乳動物源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 哺乳動物源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Mammalian-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5290 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用探針法實時熒光定量PCR技術，專為檢測食品及其他材料中哺乳動物源性成分而設計。通過針對哺乳動物高度保守基因序列的特異性引物和探物探針，實現(xiàn)對樣品中哺乳動物DNA成分的快速、靈敏檢測，適用于食品真?zhèn)舞b定和安全監(jiān)管。
預期用途：科研用，檢測食品及其他材料中哺乳動物源性成分
技術原理
本試劑盒基于TaqMan探針法熒光定量PCR技術：
特異性引物設計：針對哺乳動物源性成分高度保守區(qū)設計引物，確保檢測特異性
熒光探針系統(tǒng)：探針5'端標記報告熒光基團，3'端標記淬滅基團，PCR擴增時Taq酶水解探針釋放熒光信號
實時監(jiān)測：通過qPCR儀實時監(jiān)測熒光信號變化，實現(xiàn)定量分析
產(chǎn)品組成
2×Probe qPCR Mix
哺乳動物源性成分引物探針混合液
陽性對照（1×10? copies/μL）
陰性對照（無核酸酶水）
RNase-Free Water
操作流程
樣本處理
DNA提?。菏褂眉嫒莸暮怂崽崛≡噭┖刑崛悠稤NA
質量控制：建議測定DNA濃度和純度（A260/A280比值1.8-2.0）
標準曲線制備（定量檢測時）
標記6支離心管（7-2號）
7號管加90μL無核酸酶水，其余各加45μL
取10μL陽性對照加入7號管，混勻后取5μL轉移至6號管，依次稀釋至2號管
最終獲得10?-102 copies/μL的6個梯度標準品
PCR反應體系配制（20μL體系）
| 組分 | 體積(μL) |
| 2×Probe qPCR Mix | 10 |
| 引物探針混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| RNase-Free Water | 6 |
擴增程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預變性 | 95℃ | 3min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 15sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30sec | 40 |
| 熒光采集 | 60℃ | - | - |
注：不同儀器可能需調整參數(shù)，請參照儀器說明書
結果分析
定量分析
以陽性對照濃度的log值為橫坐標，Ct值為縱坐標繪制標準曲線
通過樣品Ct值計算DNA濃度
定性分析
陽性對照：Ct值≤30，典型S型擴增曲線
陰性對照：Ct值≥38或無Ct值
樣品判定：
Ct值≤35：陽性
Ct值≥38：陰性
35<Ct值<38：需復測，復測Ct值<40且有擴增曲線判為陽性
性能參數(shù)
檢測限：≤10 copies/反應
線性范圍：102-10? copies/μL（R2≥0.99）
特異性：不與常見非哺乳動物DNA發(fā)生交叉反應
重復性：Ct值變異系數(shù)<5%
注意事項
實驗分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴增分析應在獨立區(qū)域進行
使用帶濾芯吸頭，避免氣溶膠污染
所有組分使用前需完全溶解并混勻，短暫離心后使用
反應液避光保存，避免反復凍融（≤3次）
實驗后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒工作區(qū)
本產(chǎn)品僅限科研使用，不適用于臨床診斷
運輸與儲存
運輸條件：低溫運輸（冰袋或干冰）
儲存條件：-20℃避光保存
有效期：12個月
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關鍵字： 哺乳動物源性成分;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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