哺乳動(dòng)物源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 哺乳動(dòng)物源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Mammalian-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR5290 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用探針法實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，專為檢測(cè)食品及其他材料中哺乳動(dòng)物源性成分而設(shè)計(jì)。通過針對(duì)哺乳動(dòng)物高度保守基因序列的特異性引物和探物探針，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中哺乳動(dòng)物DNA成分的快速、靈敏檢測(cè)，適用于食品真?zhèn)舞b定和安全監(jiān)管。
預(yù)期用途：科研用，檢測(cè)食品及其他材料中哺乳動(dòng)物源性成分
技術(shù)原理
本試劑盒基于TaqMan探針法熒光定量PCR技術(shù)：
特異性引物設(shè)計(jì)：針對(duì)哺乳動(dòng)物源性成分高度保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，確保檢測(cè)特異性
熒光探針系統(tǒng)：探針5'端標(biāo)記報(bào)告熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，PCR擴(kuò)增時(shí)Taq酶水解探針釋放熒光信號(hào)
實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)：通過qPCR儀實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化，實(shí)現(xiàn)定量分析
產(chǎn)品組成
2×Probe qPCR Mix
哺乳動(dòng)物源性成分引物探針混合液
陽性對(duì)照（1×10? copies/μL）
陰性對(duì)照（無核酸酶水）
RNase-Free Water
操作流程
樣本處理
DNA提?。菏褂眉嫒莸暮怂崽崛≡噭┖刑崛悠稤NA
質(zhì)量控制：建議測(cè)定DNA濃度和純度（A260/A280比值1.8-2.0）
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（定量檢測(cè)時(shí)）
標(biāo)記6支離心管（7-2號(hào)）
7號(hào)管加90μL無核酸酶水，其余各加45μL
取10μL陽性對(duì)照加入7號(hào)管，混勻后取5μL轉(zhuǎn)移至6號(hào)管，依次稀釋至2號(hào)管
最終獲得10?-102 copies/μL的6個(gè)梯度標(biāo)準(zhǔn)品
PCR反應(yīng)體系配制（20μL體系）
| 組分 | 體積(μL) |
| 2×Probe qPCR Mix | 10 |
| 引物探針混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| RNase-Free Water | 6 |
擴(kuò)增程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 3min | 1 |
| 變性 | 95℃ | 15sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30sec | 40 |
| 熒光采集 | 60℃ | - | - |
注：不同儀器可能需調(diào)整參數(shù)，請(qǐng)參照儀器說明書
結(jié)果分析
定量分析
以陽性對(duì)照濃度的log值為橫坐標(biāo)，Ct值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
通過樣品Ct值計(jì)算DNA濃度
定性分析
陽性對(duì)照：Ct值≤30，典型S型擴(kuò)增曲線
陰性對(duì)照：Ct值≥38或無Ct值
樣品判定：
Ct值≤35：陽性
Ct值≥38：陰性
35<Ct值<38：需復(fù)測(cè)，復(fù)測(cè)Ct值<40且有擴(kuò)增曲線判為陽性
性能參數(shù)
檢測(cè)限：≤10 copies/反應(yīng)
線性范圍：102-10? copies/μL（R2≥0.99）
特異性：不與常見非哺乳動(dòng)物DNA發(fā)生交叉反應(yīng)
重復(fù)性：Ct值變異系數(shù)<5%
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增分析應(yīng)在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行
使用帶濾芯吸頭，避免氣溶膠污染
所有組分使用前需完全溶解并混勻，短暫離心后使用
反應(yīng)液避光保存，避免反復(fù)凍融（≤3次）
實(shí)驗(yàn)后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒工作區(qū)
本產(chǎn)品僅限科研使用，不適用于臨床診斷
運(yùn)輸與儲(chǔ)存
運(yùn)輸條件：低溫運(yùn)輸（冰袋或干冰）
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存
有效期：12個(gè)月
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關(guān)鍵字： 哺乳動(dòng)物源性成分;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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