螺源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 螺源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Snail-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5289 |
檢測原理
基于TaqMan探針法熒光定量PCR技術:
特異性探針:5'端標記熒光報告基團,3'端標記淬滅基團。
信號釋放:PCR延伸階段,DNA聚合酶切割探針,使報告基團與淬滅基團分離,釋放熒光信號。
定量分析:通過Ct值(循環(huán)閾值)與標準曲線,計算樣本中螺源性DNA的初始濃度(絕對定量)或相對含量。
核心優(yōu)勢:
高特異性:需引物和探針同時結合目標序列,顯著降低假陽性風險。
高靈敏度:可檢測低至102拷貝/μL的靶標DNA。
寬動態(tài)范圍:線性范圍覆蓋102–10?拷貝/μL。

試劑盒組成
| 成分 | 包裝規(guī)格 | 功能說明 |
| PCR預混液 | 500 μL(含酶、dNTPs) | 提供擴增所需基礎反應體系 |
| 螺源性引物混合液 | 100 μL | 特異性擴增目標序列 |
| 熒光探針 | 50 μL(避光保存) | 靶標檢測與信號生成 |
| 陽性對照(1×10?拷貝/μL) | 50 μL | 驗證實驗體系有效性 |
| 陰性對照(超純水) | 1 mL | 排除污染與假陽性 |
| 核酸釋放劑(試用裝)| 1 mL | 簡化DNA提取流程(可選) |
實驗操作流程
1. 標準曲線制備(以10倍梯度稀釋為例)
稀釋步驟:
取6支離心管,分別加入45 μL專用稀釋液。
首管加入5 μL陽性對照(1×10?拷貝/μL),震蕩混勻,得到1×10?拷貝/μL標準品。
依次稀釋至1×102拷貝/μL(共6個梯度)。
注意事項:
獨立操作區(qū)域,避免交叉污染。
使用帶濾芯槍頭。
2. 樣本DNA提取
推薦使用柱式DNA提取試劑盒或配套核酸釋放劑,確保提取的DNA無抑制劑(如多糖、酚類)。
3. PCR反應體系(20 μL/反應)
| 組分 | 體積(μL) |
| PCR預混液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 熒光探針 | 1 |
| 模板DNA | 2 |
| 超純水 | 補足至20 |
4. 擴增程序(以ABI 7500為例)
| 步驟 | 溫度/時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預變性 | 95℃, 3 min | 1 |
| 變性 | 95℃, 15 s | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃, 1 min | |
數(shù)據(jù)分析
定量檢測:以標準曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸,計算樣本濃度。
定性檢測:
陰性:Ct≥40或無擴增曲線。
陽性:Ct≤36且曲線呈指數(shù)增長。
可疑結果(36<Ct<40):需重復實驗確認。
注意事項
防污染措施:
陽性對照與樣本分區(qū)域操作,使用紫外滅菌工作臺。
實驗后及時清理臺面,避免氣溶膠污染。
試劑保存:
酶與探針需分裝保存,避免反復凍融。
質(zhì)量控制:
每批次實驗需包含陰性對照(NTC)與陽性對照。
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關鍵字: 螺源性成分;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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