金槍魚(yú)源性成分探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 金槍魚(yú)源性成分探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒 | 英文名稱 | Tuna-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號(hào) | PR5293 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用探針?lè)晒舛?/span>PCR技術(shù)（TaqMan探針），專(zhuān)用于檢測(cè)金槍魚(yú)源性成分，具有高特異性、高靈敏度及穩(wěn)定性。適用于食品、飼料等樣本中金槍魚(yú)源性成分的定性及定量分析，僅限科研用途。
技術(shù)原理
探針?lè)ㄔ恚?/span>
探針5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)（如FAM），3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號(hào)，信號(hào)強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物量成正比。
實(shí)時(shí)定量：通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)增長(zhǎng)（Ct值）實(shí)現(xiàn)模板的定量分析。
產(chǎn)品組成
| 成分 | 規(guī)格 | 功能說(shuō)明 |
| qRT-PCR緩沖液 | 500 μL | 提供反應(yīng)體系基礎(chǔ)環(huán)境 |
| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL | 含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq DNA聚合酶等 |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1 mL | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋及陰性對(duì)照制備 |
| 引物混合液 | 100 μL | 金槍魚(yú)特異性引物（保守區(qū)設(shè)計(jì)）|
| TaqMan探針 | 50 μL | 金槍魚(yú)特異性探針（FAM標(biāo)記） |
| 陽(yáng)性對(duì)照（1×10?拷貝/μL） | 50 μL | 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立及質(zhì)控 |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 | 操作流程及數(shù)據(jù)分析指南 |
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
保存條件：-20℃避光保存，有效期12個(gè)月。
運(yùn)輸方式：低溫干冰運(yùn)輸。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
將陽(yáng)性對(duì)照按10倍梯度稀釋?zhuān)?02~10?拷貝/μL），每個(gè)梯度獨(dú)立操作以避免污染。
2. 樣本RNA提取
推薦使用柱式病毒RNA提取試劑盒，同時(shí)設(shè)置陰/陽(yáng)性對(duì)照（PC/NC）。
3. qRT-PCR反應(yīng)體系（20 μL）
| 成分 | 樣品管（μL） | 陰性對(duì)照（μL） | 標(biāo)準(zhǔn)曲線管（μL） |
| qRT-PCR緩沖液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探針 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 樣本RNA/標(biāo)準(zhǔn)品 | 5 | - | 5（對(duì)應(yīng)梯度） |
| 超純水 | - | 5 | - |
4. 反應(yīng)程序
| 步驟 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |
| 擴(kuò)增（40循環(huán)）| 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（采集FAM信號(hào)） |
數(shù)據(jù)分析
定量分析：以陽(yáng)性對(duì)照log值為橫軸、Ct值為縱軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本濃度。
定性分析：陰性對(duì)照Ct≥40；陽(yáng)性對(duì)照Ct≤39。樣本Ct≤39判為陽(yáng)性。
注意事項(xiàng)
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、擴(kuò)增需在不同區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染。
質(zhì)控要求：每批實(shí)驗(yàn)需包含陰/陽(yáng)性對(duì)照。
局限性：
基因突變或提取效率差異可能導(dǎo)致假陰性；
污染或試劑保存不當(dāng)可致假陽(yáng)性/定量偏差。
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關(guān)鍵字： 金槍魚(yú)源性成分;探針?lè)?PCR鑒定試劑盒;
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