胡蘿卜源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 胡蘿卜源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Carrot-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR5304 |
產(chǎn)品原理
本試劑盒基于探針法熒光定量PCR技術(shù)，通過Taq酶的5’核酸外切酶活性切割與靶序列結(jié)合的探針（5’端標記熒光報告基團，3’端標記淬滅基團），實時檢測擴增過程中熒光信號變化，實現(xiàn)對胡蘿卜源性成分的定量或定性分析。
產(chǎn)品特點
高靈敏度：優(yōu)化的引物和探針設(shè)計，檢測限低至10拷貝/μL。
高特異性：針對胡蘿卜源性成分保守序列設(shè)計，避免交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混緩沖液、酶及引物探針，用戶僅需提供樣品核酸模板。
雙用途：支持定性和定量檢測，定量線性范圍達5個數(shù)量級（102~10?拷貝/μL）。
質(zhì)量控制：含陽性對照（無傳染性DNA片段）和陰性對照，確保結(jié)果可靠性。
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格 |
| 探針法qPCR緩沖液 | 500μL |
| qPCR酶混合液 | 100μL |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1mL |
| 胡蘿卜源性成分引物混合液 | 100μL |
| 胡蘿卜源性成分探針 | 50μL |
| 陽性對照（1×10?拷貝/μL） | 50μL |
| 說明書 | 1份 |
使用方法
1. 標準曲線制備
標記6管，依次稀釋陽性對照（10?~102拷貝/μL），獨立操作避免污染。
示例：7號管加5μL陽性對照至45μL稀釋液，震蕩混勻得10?拷貝/μL，依次梯度稀釋。
2. 樣品RNA制備
建議設(shè)置N+2個樣本（含陽性/陰性對照），使用柱式提取法或兼容的RNA提取試劑盒。
3. qPCR反應(yīng)體系（20μL）
| 成分 | 樣品管 | 陰性對照 | 標準曲線管 |
| qPCR緩沖液 | 10μL | 10μL | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探針 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 樣品RNA/標準品 | 5μL | - | 5μL |
| 超純水 | - | 5μL | - |
4. 反應(yīng)程序
| 步驟 | 溫度 | 時間 |
| 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 30 min |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 min |
| 40循環(huán) | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信號） |
數(shù)據(jù)分析
定量檢測：以標準曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計算樣品濃度。
定性檢測：陰性對照Ct≥40；陽性對照Ct≤36。樣品Ct≤36判為陽性，≥40為陰性，36~40需復(fù)測。
注意事項
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)域進行，避免交叉污染。
試劑解凍：使用前充分混勻并短暫離心。
污染控制：實驗后以10%次氯酸或75%酒精清潔臺面及移液器。
適用范圍：僅限科研，不可用于臨床診斷。
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關(guān)鍵字： 胡蘿卜源性成分;探針法熒光定量;PCR試劑盒;
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