產(chǎn)品原理
本試劑盒基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)，采用探針法檢測(cè)薄荷特異性核酸序列。探針5'端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)，通過Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探針，釋放熒光信號(hào)。通過監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過程中熒光強(qiáng)度的變化，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)序列的定性和定量分析。
產(chǎn)品名稱 | 薄荷探針法PCR鑒定試劑盒 | 英文名稱 | Herba Menthae Haplocalycis Probe-based PCR Identification Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR5182 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
高靈敏度與特異性：引物及探針針對(duì)薄荷保守序列設(shè)計(jì)，避免與其他微生物交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混緩沖液、酶及探針，用戶僅需提供RNA模板。
內(nèi)置對(duì)照：含陽(yáng)性對(duì)照（1×10^8拷貝/μL），便于區(qū)分假陰性結(jié)果。
兼容性：適配多數(shù)RNA提取試劑盒，推薦配套柱式病毒RNA提取試劑盒。
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格 |
| 探針法qRT-PCR緩沖液 | 500 μL |
| 探針法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |
| 熒光PCR專用模板稀釋液 | 1 mL |
| 薄荷探針法引物混合液 | 100 μL |
| 薄荷qRT-PCR探針 | 50 μL |
| 陽(yáng)性對(duì)照（1×10^8拷貝/μL） | 50 μL |
| 說明書 | 1份 |
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
按10倍梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照（10^2–10^7拷貝/μL），獨(dú)立操作避免污染。
標(biāo)記離心管（7–2號(hào)），依次加入稀釋液與陽(yáng)性對(duì)照，渦旋混勻后冰上保存。
2. RNA提取
建議設(shè)置陰性對(duì)照（NC）和陽(yáng)性對(duì)照（PC），使用配套R(shí)NA提取試劑或自選方法。
3. qRT-PCR反應(yīng)（20 μL體系）
反應(yīng)體系：
樣品管：10 μL緩沖液 + 2 μL酶混合液 + 1 μL探針 + 2 μL引物 + 5 μL RNA模板。
陰性對(duì)照：以水替代模板。
標(biāo)準(zhǔn)曲線管：加入梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品。
反應(yīng)程序：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 30 min
預(yù)變性：94℃ 10 min
40循環(huán)：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信號(hào)）
數(shù)據(jù)分析
定量分析：以標(biāo)準(zhǔn)曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計(jì)算樣品濃度。
定性分析：
陽(yáng)性：Ct ≤ 35，擴(kuò)增曲線呈典型S型。
陰性：Ct ≥ 40或無擴(kuò)增。
可疑結(jié)果（35 < Ct < 40）：需重復(fù)檢測(cè)。
注意事項(xiàng)
操作需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，避免RNA降解及交叉污染。
試劑解凍后需充分混勻，短暫離心后使用。
陽(yáng)性對(duì)照需最后加入，防止污染其他組分。
本產(chǎn)品僅限科研使用，不適用于臨床診斷。
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關(guān)鍵字： 薄荷;探針法;PCR鑒定試劑盒;
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