人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記;HBL-1-LUC-PURO
產(chǎn)品信息：

1. 細(xì)胞背景與基本特性

母本細(xì)胞：HBL-1 (人彌漫性大 B 細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞)

種屬來源：人 (Homo sapiens)

組織來源：淋巴瘤

生長特性：懸浮生長（淋巴母細(xì)胞樣）

細(xì)胞形態(tài)：圓形，部分聚團(tuán)

標(biāo)記基因：

LUC：熒光素酶，可用于生物發(fā)光成像（需底物熒光素）。

PURO：嘌呤霉素抗性，用于維持篩選壓力，確保標(biāo)記基因的穩(wěn)定表達(dá)。

應(yīng)用領(lǐng)域：彌漫性大 B 細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）研究、NF-κB 信號通路研究、抗腫瘤藥物篩選、裸鼠成瘤及活體示蹤。

2. 核心參數(shù)速覽

特征  描述

培養(yǎng)基  RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S

生長狀態(tài)  懸浮生長 (圓形)

傳代比例  1:2 ～ 1:4

凍存條件  90% FBS + 10% DMSO 或?qū)Ｓ脽o血清凍存液

3. 詳細(xì)培養(yǎng)操作指南

HBL-1-LUC-PURO 細(xì)胞的培養(yǎng)方式與普通 HBL-1 細(xì)胞基本一致，主要區(qū)別在于培養(yǎng)基中需要添加篩選抗生素以維持熒光素酶的表達(dá)。

基礎(chǔ)培養(yǎng)條件

溫度：37℃

氣體環(huán)境：95% 空氣 + 5% CO

濕度：飽和濕度

推薦培養(yǎng)基配方

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：RPMI-1640。

血清：10% 胎牛血清 (FBS)。

雙抗：1% 青霉素-鏈霉素 (P/S)。

篩選抗生素：嘌呤霉素 (Puromycin)。

注意：為了防止報(bào)告基因丟失，建議在培養(yǎng)基中持續(xù)添加適量的嘌呤霉素。通常維持濃度為 0.5 - 1.0 μg/mL（具體濃度需參考構(gòu)建時(shí)的篩選濃度）。

傳代操作 (當(dāng)細(xì)胞密度達(dá) 80%-90% 或細(xì)胞濃度過高時(shí))

HBL-1 細(xì)胞屬于懸浮/半貼壁細(xì)胞（部分細(xì)胞可能貼壁不牢），操作相對簡單，無需胰酶消化。

觀察：在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和活率。細(xì)胞呈圓形，單個(gè)或聚集成團(tuán)。

收集：將培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞懸液直接轉(zhuǎn)移至離心管中。如果瓶底有少量貼壁細(xì)胞，可用槍頭輕輕吹打下來并入懸液。

離心：1000 rpm (約 200-300g) 離心 5 分鐘。

棄上清：小心吸去上清液。

重懸：加入新鮮預(yù)熱的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀。

分裝：按 1:2 至 1:4 的比例分裝到新瓶中。

技巧： 如果細(xì)胞聚團(tuán)嚴(yán)重，可輕輕吹打?qū)⑵浯瞪?，但不要過度用力以免損傷細(xì)胞膜。

凍存與復(fù)蘇

凍存液：推薦使用 90% FBS + 10% DMSO，或?qū)Ｓ玫臒o血清凍存液。

復(fù)蘇：37℃ 水浴快速搖晃解凍，立即轉(zhuǎn)移至含完全培養(yǎng)基的離心管中混勻，離心去除上清（去除 DMSO），重懸后接種。

4. 注意事項(xiàng)與常見問題

運(yùn)輸中的脫落（常見問題）：

懸浮細(xì)胞在運(yùn)輸途中極易因震動而分散。收到細(xì)胞后，如果直接觀察瓶底無明顯細(xì)胞沉淀，請務(wù)必先顛倒混勻或離心運(yùn)輸培養(yǎng)基，切勿直接丟棄。

細(xì)胞聚團(tuán)：

HBL-1 細(xì)胞容易形成大的細(xì)胞團(tuán)塊。少量聚團(tuán)是正常的，但如果團(tuán)塊過大，可能會導(dǎo)致中心細(xì)胞缺氧死亡。建議傳代時(shí)輕輕吹散細(xì)胞團(tuán)。

熒光素酶活性檢測：

該細(xì)胞表達(dá)熒光素酶，可用于活體成像。在進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)前，建議先在體外驗(yàn)證熒光素酶的表達(dá)活性（加入熒光素底物后檢測發(fā)光值）。

篩選壓力：

如果在培養(yǎng)過程中去除了嘌呤霉素（Puromycin），部分細(xì)胞可能會丟失 LUC 報(bào)告基因，導(dǎo)致熒光信號減弱。建議在實(shí)驗(yàn)對照組中保持抗生素篩選。

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細(xì)胞具體特點(diǎn)如下：

環(huán)境與營養(yǎng)：需無菌環(huán)境、精確的溫度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），動物細(xì)胞常需血清，植物細(xì)胞需激素。

生長方式：貼壁細(xì)胞需表面附著，懸浮細(xì)胞自由漂浮，半貼壁半懸浮兼具兩者特性。

傳代與密度：貼壁細(xì)胞需胰酶消化傳代，懸浮細(xì)胞直接分瓶；密度達(dá)80%-90%時(shí)需傳代，避免營養(yǎng)枯竭與代謝抑制。

敏感性：對剪切應(yīng)力、污染、溫度變化敏感，需定期更換培養(yǎng)液清除代謝物。

應(yīng)用與局限：便于活細(xì)胞觀察與實(shí)驗(yàn)控制，但體外環(huán)境與體內(nèi)存在差異，長期傳代可能導(dǎo)致遺傳不穩(wěn)定與去分化。