丙酮酸羧化酶(PC)測(cè)定試劑盒/微量法/96樣
測(cè)定意義：
丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase ，PC ，EC 6.4.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、霉菌和酵母的線粒體中，催化丙酮酸、ATP 、CO2 和水生成草酰乙酸、ADP 和 Pi，是糖異生過(guò)程的第一個(gè)限速酶，在保證血糖的動(dòng)態(tài)平衡方面起著重要的作用。
測(cè)定原理：
PC 催化丙酮酸、ATP 、CO2 和水生成草酰乙酸、ADP 和 Pi，蘋(píng)果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和 NADH生成蘋(píng)果酸和 NAD+ ，在 340nm 下測(cè)定 NADH 氧化速率，即可反映 PC 活性。
自備儀器和用品：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；置于 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 5 分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四的配制：在試劑四瓶中加入 1mL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
2 、 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本、10μL 試劑四和 180 μL 工作液，立即混勻，記錄340nm 處初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2 ，計(jì)算 ΔA=A1-A2。
注 意：
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
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