本試劑盒運用酶聯(lián)免疫吸附夾心檢測法原理，酶標板預(yù)先包被人PC特異性抗體，待測樣本中的羰基化蛋白可與包被抗體特異性結(jié)合，洗滌除去未結(jié)合的雜蛋白及雜質(zhì)后，加入酶標記抗PC二抗并形成穩(wěn)定的免疫夾心復(fù)合物，經(jīng)二次洗板去除游離標記抗體，加入顯色底物發(fā)生酶促顯色反應(yīng)，顯色深淺與樣本中PC含量成正比，通過酶標儀檢測吸光度，對照標準曲線即可測定樣本中羰基化蛋白的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人羰基化蛋白(PC)ELISA試劑盒
英文名稱：PC ELISA Kit
貨號：Y-E2941
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最小可測值 0.1nmol/mg 蛋白
檢測范圍：0.2～15nmol/mg 總蛋白
反應(yīng)時間：封閉 30min，樣本孵育 75min，顯色反應(yīng) 20min
保存條件：試劑盒主體 2～8℃；底物液需單獨避光 2～8℃保存
顯色系統(tǒng)：改良型 TMB 顯色底物，終止后溶液由藍轉(zhuǎn)黃色
檢測波長：單波長 450nm 直接讀數(shù)，無需參比孔
標準曲線繪制：五組梯度標準品，Origin 軟件四參數(shù)擬合，R2 要求＞0.995
注意事項：組織樣本需充分裂解并定量總蛋白，否則結(jié)果偏差顯著
關(guān)鍵注意事項：
本試劑盒僅科研體外檢測，嚴禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強光直射，TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。
孵育溫度嚴格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分，殘液會造成非特異性結(jié)合，背景偏高。
終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。
實驗廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運輸全程 2～8℃冷鏈，嚴禁高溫暴曬。
實驗步驟如下：
試劑盒室溫回溫 20min，取出 PC 抗體包被板，倒掉孔內(nèi)保存液，洗滌液洗孔 2 遍，吸水紙拍干微孔板。
排布孔位：空白孔、標準品梯度孔、待測樣本孔；標準品孔加入不同濃度 PC 標準品 50μL，樣本孔加入蛋白提取后待測液 50μL，空白孔加稀釋緩沖液。
每孔加入辣根過氧化物酶標記抗體液 50μL，封板密封，37℃水浴孵育 55min。
棄去孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔加滿洗滌液浸泡 35s 棄除，重復(fù)洗板 4 次，倒置拍干殘留洗液。
每孔分別加入顯色 A 液 50μL、顯色 B 液 50μL，避光環(huán)境 37℃孵育顯色 18min。
每孔滴加終止液 50μL，混勻終止底物顯色。
酶標儀 450nm 測吸光度，依據(jù)標準曲線計算樣本羰基化蛋白濃度。
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