本試劑盒基于經(jīng)典雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，將APCR特異性捕獲抗體固定于微孔板固相載體，加入待測(cè)樣本與標(biāo)準(zhǔn)品后，樣本內(nèi)APCR抗原與固相抗體發(fā)生特異性免疫結(jié)合，隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的APCR檢測(cè)抗體，形成穩(wěn)定夾心免疫復(fù)合物，經(jīng)洗滌徹底洗除未結(jié)合雜質(zhì)與游離抗體后，加入底物催化顯色，顯色強(qiáng)度與樣本中APCR含量成正比，通過檢測(cè)吸光度并擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，可定量測(cè)定人樣本中APCR的表達(dá)水平。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測(cè)限≤0.08U/mL

檢測(cè)范圍：0.16U/mL~5U/mL

反應(yīng)時(shí)間：一抗室溫孵育 90min；二抗避光 45min；顯色 20min；終止即刻讀數(shù)

保存條件：試劑盒整體 2~8℃冷藏，不可冷凍；濃縮洗滌液低溫析出結(jié)晶可 37℃水浴溶解后使用

顯色系統(tǒng)：雙組份 A+B TMB 顯色體系

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 單波長(zhǎng)檢測(cè)

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋 7 個(gè)濃度點(diǎn)，線性回歸擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，稀釋樣本結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算原值

注意事項(xiàng)：血清樣本采集后 3000r/min 離心 15min 分離；禁止使用疊氮鈉防腐樣本，會(huì)滅活標(biāo)記酶
儲(chǔ)存與有效期：

未開封整套試劑盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷凍；有效期 12 個(gè)月。

開封后保存

剩余酶標(biāo)板條：自封袋密封，內(nèi)置干燥劑 2～8℃避光；1 個(gè)月內(nèi)用完。

HRP 酶結(jié)合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。

濃縮洗滌液：2～30℃常溫保存，結(jié)晶溫水溶解不影響效果。

復(fù)溶后標(biāo)準(zhǔn)品：分裝 - 20℃凍存，避免反復(fù)凍融，1 個(gè)月內(nèi)使用。

過期試劑禁止使用。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

樣本前處理：新鮮采集靜脈血離心分離血漿樣本，不可使用溶血、脂血樣本，用試劑盒配套稀釋液對(duì)血漿進(jìn)行 1:5 稀釋，顛倒混勻后放置冰上暫存。

板孔分組加樣：取出 APCR 預(yù)包被微孔板，標(biāo)記空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品梯度孔、待測(cè)樣本孔，樣本孔加入稀釋后待測(cè)液 100μL，標(biāo)準(zhǔn)品孔添加不同濃度 APCR 標(biāo)準(zhǔn)品 100μL，空白孔補(bǔ)稀釋液。

一步偶聯(lián)抗體加注：不進(jìn)行前置洗板，每孔直接加入酶標(biāo)記檢測(cè)抗體工作液 60μL，輕柔水平晃動(dòng)酶標(biāo)板 30s，保證孔內(nèi)液體完全融合。

恒溫避光孵育：封板膜嚴(yán)實(shí)封蓋酶標(biāo)板，放入 37℃避光孵育環(huán)境中反應(yīng) 55min，保證抗原抗體充分特異性結(jié)合。

反復(fù)洗板除雜：棄去孔中混合液，每孔注滿洗滌液，靜置 25s 后用力拍干，連續(xù)洗板 4 次，倒置酶標(biāo)板在吸水紙上徹底吸干殘留洗液。

避光底物顯色：每孔加入 TMB 顯色混合工作液 100μL，37℃避光顯色 12min，嚴(yán)格把控顯色時(shí)長(zhǎng)，避免過曝導(dǎo)致數(shù)值偏差。

終止讀數(shù)定量：加入終止液 40μL 終止酶促反應(yīng)，輕板混勻后立刻使用酶標(biāo)儀 450nm 測(cè)定吸光度，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線換算樣本 APCR 含量。