輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)定試劑盒/微量法/48樣

測(cè)定意義：

輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NADP+和 NADPH 含量測(cè)定可以計(jì)算 NADP （NADPH + NADP+ )含量和 NADPH/NADP+ 比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+ 比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一，而且在 PPP 途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。

測(cè)定原理：

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中 NADP+和 NADPH。NADPH 通過(guò) PMS 的遞氫作用，使氧化型噻唑藍(lán)（MTT）還原為甲瓚，570nm 下檢測(cè)吸光值，從而測(cè)定 NADPH 含量。利用 6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原 NADP+為 NADPH ，從而檢測(cè) NADP+含量。

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

測(cè)定步驟：

加樣表(在 1.5mL 棕色 EP 管中按下表依次加樣）：

充分混勻，靜置 5min 后，20000g ，25℃離心 5min，棄上清，沉淀中加入： 

注 意：

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。