輔酶ⅠNAD(H)含量測定試劑盒/分光光度法/24樣

測定意義：

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要氫受體，生成的 NADH  經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧， 在合成 ATP   的同時，形成大量的 ROS ，同時 NADH  再生為 NAD+ 。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和 TCA  循環(huán)的強弱。較高的 NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA  循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對細胞信號傳導(dǎo)、代謝和基因表達等具有重要的調(diào)控作用。

測定原理：

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH ，NADH  通過 PMS   的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT）為甲瓚，在 570nm   下檢測吸光值；而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原為 NADH，進一步采用 MTT  還原法檢測。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 mL  玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

測定步驟：
加樣表(在 1.5mL  棕色 EP   管中按下表依次加樣）：

充分混勻，靜置 5min  后，20000g ，25℃離心 5min，棄上清，沉淀中加入： 

注 意：

正式測定前務(wù)必取 2-3  個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。