NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP－MDH)測(cè)定試劑盒/96樣
測(cè)定意義：
MDH （EC 1.1.1.37 ）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中 MDH 是 TCA 循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH 在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH 分為NAD-依賴的 MDH 和 NADP-依賴的 MDH ， NADP-MDH 主要存在于真核細(xì)胞中。
測(cè)定原理：
NADP-MDH 催化 NADPH 還原草酰乙酸生成蘋果酸，導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。
自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2 、檢測(cè)工作液的配制：用時(shí)在試劑三中加入 19mL 試劑二和 0.5mL 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
3、測(cè)定前將檢測(cè)工作液在37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。
4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 樣本和 195μL 工作液，混勻后立即記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2 ，計(jì)算 ΔA=A1-A2。
注 意：
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
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