檢驗(yàn)原理:
基于SYBR Green染料法熒光定量PCR技術(shù)，利用一對(duì)特異性引物擴(kuò)增人皰疹病毒保守基因序列。SYBR Green染料可非特異性結(jié)合雙鏈DNA，在PCR擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)隨產(chǎn)物積累而增強(qiáng)，通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度變化實(shí)現(xiàn)病毒DNA的定性檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng)
| 人皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Human Herpesvirus Universal SYBR qPCR Kit |
| 產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類(lèi) | 熒光定量PCR |
| 檢測(cè)類(lèi)型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR2645 |
試劑組成:
2×qPCR Master Mix：預(yù)混的SYBR Green染料、dNTPs、緩沖液（500μL×1管）
熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液（1mL×1管）
人皰疹病毒通用引物混合物（100μL×1管）
陽(yáng)性質(zhì)控品（50μL×1管，含病毒DNA片段）
陰性質(zhì)控品（250μL×1管，無(wú)模板對(duì)照）
使用說(shuō)明書(shū)（1份）
實(shí)驗(yàn)步驟:
1. 樣本核酸提?。颖咎幚韰^(qū)）
取100μL樣本，使用離心柱法核酸提取試劑盒純化DNA，洗脫體積50μL。
2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)樣本數(shù)（N=樣本數(shù)+1陰性質(zhì)控+1陽(yáng)性質(zhì)控）配制反應(yīng)體系，每管20μL：
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2×qPCR Master Mix 10μL
引物混合物 1μL
模板DNA 5μL
RNase-free水 4μL
3. PCR擴(kuò)增（擴(kuò)增區(qū)）
?程序設(shè)置?（以ABI 7500為例）：
text
95℃ 3分鐘（預(yù)變性）
95℃ 10秒 → 60℃ 1分鐘（40循環(huán)，采集熒光信號(hào)）
4. 結(jié)果分析
?基線(xiàn)設(shè)定?：循環(huán)6-15；?閾值?：超過(guò)陰性質(zhì)控曲線(xiàn)峰值。
?判讀標(biāo)準(zhǔn)?：
陰性質(zhì)控：Ct值≥40或無(wú)擴(kuò)增曲線(xiàn)。
陽(yáng)性質(zhì)控：Ct值≤35且有S形擴(kuò)增曲線(xiàn)。
樣本：Ct值≤35且擴(kuò)增曲線(xiàn)呈指數(shù)增長(zhǎng)判為陽(yáng)性。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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關(guān)鍵字： 人皰疹病毒通用;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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