檢驗(yàn)原理
本試劑盒采用SYBR Green染料法實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，針對(duì)鯉皰疹病毒（KHV）保守基因區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，通過(guò)熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)核酸擴(kuò)增過(guò)程，實(shí)現(xiàn)定性或定量檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 鯉皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱(chēng) | Cyprinid Herpesvirus Universal Dye-based qPCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類(lèi) | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類(lèi)型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR3966 |
試劑組成
KHV擴(kuò)增液：50μL ×1管
KHV反應(yīng)液：950μL ×1管
KHV陽(yáng)性質(zhì)控品（1×10^8拷貝/μL）：50μL ×1管
KHV陰性質(zhì)控品：50μL ×1管
熒光PCR專(zhuān)用模板稀釋液：1mL ×1瓶
說(shuō)明書(shū)：1份
注意：不同批號(hào)試劑不可混用，組分?jǐn)?shù)量滿足標(biāo)稱(chēng)檢測(cè)次數(shù)。
儲(chǔ)存條件及有效期
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融（≤7次），有效期12個(gè)月。
適用儀器
兼容ABI系列、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等熒光定量PCR儀。
自備耗材
無(wú)DNA/RNA酶的1.5mL離心管、0.2mL PCR管
濾芯吸頭（10μL、200μL、1000μL）
離心機(jī)、振蕩器、移液器
樣品要求
樣本類(lèi)型：胃液分泌物、嘔吐物或培養(yǎng)物（參照《臨床微生物樣本采集規(guī)范》）。
保存條件：短期-20℃，長(zhǎng)期-70℃（≤6個(gè)月），運(yùn)輸需2~8℃冰袋。
使用方法
樣品處理：按規(guī)范提取核酸，避免交叉污染。
陽(yáng)性對(duì)照稀釋?zhuān)?/span>
將陽(yáng)性質(zhì)控品（1×10^8拷貝/μL）按10倍梯度稀釋至10^2~10^7拷貝/μL，用于標(biāo)準(zhǔn)曲線制備。
PCR反應(yīng)體系：
每20μL反應(yīng)體系含：2×qPCR MagicMix、引物混合物、模板DNA。
程序設(shè)置：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；擴(kuò)增：95℃ 15秒 → 60℃ 1分鐘（40循環(huán)），信號(hào)采集于延伸階段。
數(shù)據(jù)分析
定量檢測(cè)：以陽(yáng)性對(duì)照log值為橫軸、Ct值為縱軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，推算樣品濃度。
定性檢測(cè)：
陰性對(duì)照Ct≥40；陽(yáng)性對(duì)照Ct≤30且呈典型擴(kuò)增曲線。
樣品Ct≤35為陽(yáng)性，≥40為陰性；35<Ct<40需復(fù)測(cè)。
注意事項(xiàng)
僅限科研使用，不可用于臨床診斷。
操作時(shí)需穿戴實(shí)驗(yàn)服、口罩及手套，避免污染。
陽(yáng)性對(duì)照稀釋需在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行，防止污染其他組分。
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