C-a-spase-1 活性測(cè)定試劑盒比色法/100T

中文名稱  ：Caspase-1活性檢測(cè)試劑盒

英文名稱  ：Caspase-1 Activity Assay Kit

產(chǎn)品別名  ：Caspase1 活性測(cè)定試劑盒

儲(chǔ)存條件  ：6 個(gè)月

產(chǎn)品包裝  ：盒裝

檢測(cè)方法  ：比色法

有 效 期 ： -20℃

產(chǎn)品規(guī)格  ：20T  、 50T  、 100T

試劑盒的組成和配制：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Caspase是參與細(xì)胞凋亡過(guò)程的蛋白酶家族 ，包含  10 多個(gè)成員。 Caspase- 1 是唯一可剪切  IL- 1b 和  IL- 18  前體產(chǎn)生活性細(xì)胞因子的  caspase  。Caspase- 1 通過(guò)剪切  Bcl-XL調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡 ，并通過(guò)對(duì)細(xì)胞因子前體的剪切來(lái)調(diào)控相 關(guān)細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫炎性反應(yīng)。基于  Caspase- 1 特異水解多肽底物 Tyr-Val-Ala-Asp-p-nitroanilide (YVAD-pNA) ，釋放的游離硝基苯胺 pNA 在 405 nm 有大吸收峰。采用可見光光度比色法測(cè)定  pNA 而得到Caspase 活性。適用于檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞 Caspase- 1 活性。

需自備的儀器和用品：

實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn) ，如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量）

1、培養(yǎng)細(xì)胞： 先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（約 10?個(gè)） 加 100 μL 試劑二（若裂 解不充分可提高至  150-200  μL），震蕩重懸沉淀 ， 置冰上靜置  15 min， 4℃ , 15000g 離心 10- 15min ，取上清置冰上  待測(cè)。

2、組織： 按照組織質(zhì)量（g）：試劑二體積（ mL）為  1： 5~10  的比例（建議稱取約 0.1 g 組織，加入  1 mL  試 劑二），冰浴研磨或充分剪碎，置冰上靜置 15 min  ，4℃ , 15000g離心  10- 15min ，取上清置冰上待測(cè)。

 注意事項(xiàng)：

1、由于試劑二一中含有還原劑（ DTT），建議將樣品用水稀釋 2 倍后 ，用Bradford法測(cè)定蛋白濃度 ，以降低 DTT 對(duì)蛋白濃度測(cè)定的干擾。不建議使用  BCA  法測(cè)定蛋白濃度。

2、Caspase 活性測(cè)定值低常見的原因是細(xì)胞未發(fā)生凋亡或細(xì)胞量太少 ，其次是觀測(cè)時(shí)間不恰當(dāng)。誘導(dǎo)凋亡時(shí) ，并非劑量越大時(shí)間越長(zhǎng) Caspase 活性就越高。  建議設(shè)置不同劑量和時(shí)間點(diǎn)如 0、 2  、4  、8  、 16、24 小時(shí) ，以檢測(cè)佳的觀察點(diǎn)。

3、所測(cè)樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限時(shí) ，可用試劑二稀釋樣本后重新測(cè)定。

4、蓋緊 96 孔板蓋子并用封口膜密封。 37oC 孵育 ， 肉眼可見顏色變黃時(shí)的 OD405 值約為 0.2，此時(shí)即可測(cè)定。顏色變化不明顯可延長(zhǎng)反應(yīng)或過(guò)夜，但酶活性較強(qiáng)時(shí)，孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)將導(dǎo)致反應(yīng)失去線性關(guān)系。