C-a-spase-8活性測定試劑盒比色法/100T
中文名稱 ：Caspase-8 活性檢測試劑盒
英文名稱 ：Caspase-8Activity Assay Kit
儲存條件 ：6 個月
產(chǎn)品包裝 ：盒裝
檢測方法 ：比色法
有 效 期 ： -20℃
產(chǎn)品規(guī)格 ：20T 、 50T 、 100T
試劑盒的組成和配制：
試劑名稱/規(guī)格 | 20T | 50T | 100T | 保存條件 |
試劑一 | 液體 20mL×1 瓶 | 液體20 mL1瓶 | 液體 25 mL × 1瓶 | -20℃保存 |
試劑二 | 液體30mL×1 瓶 | 液體60 mL×1瓶 | 液體 120mL× 1瓶 | -20℃保存 |
試劑三 | 液體 0.25L × 1 支 | 液體0.55mLx支 | 液體 0.55mL ×2支 | -20℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1mL × 1 支 | 液體1 mLx1支 | 液體1 mL× 1支 | -20℃保存 |
產(chǎn)品簡介：
Caspase 是參與 細(xì)胞 凋亡 過程 的 蛋白 酶家族 ， 包 含 10 多 個成 員 。 Caspase-8 也 稱FLICE 、MACH 或 Mch5，通 常以酶原的形式存在，凋亡時激活 ， 被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的上游 caspase。在 Fas-receptor 和 TNFR- 1 介導(dǎo) 的凋亡過程中 caspase-8被激活形成二聚體 ，進(jìn)而激活下游 caspase-4、 6、9 、 10。
本試劑盒測定原理基于 Caspase-8 特異水解其多肽底物 Ac-IETD-pNA(N-acetyl-Ile-Glu-Thr-Asp-p-nitroanilide) ， 釋放出游離的硝基苯胺 pNA ，后者呈黃色在 405nm 具有大吸收峰 ，采用可見光光度比色法進(jìn)行測定。其吸光 度值對應(yīng)于Caspase-8 的水解活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、100μL 玻璃比色皿/96 孔板、 臺式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研 缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量）：
1、培養(yǎng)細(xì)胞： 先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（約 106?個）加 100 μL 試劑二（若裂解不充分可提高至 150-200μL），震蕩重懸沉淀 ， 置冰上靜置 15 min， 4℃ , 15000g 離心 10- 15min ，取上清置冰上 待測。
2、組織： 按照組織質(zhì)量（g）：試劑二體積（ mL）為 1： 5~10 的比例（建議稱取約 0.1 g 組織，加入 1 mL 試 劑二），冰浴研磨或充分剪碎，置冰上靜置 15 min ，4℃ , 15000g離心 10- 15min ，取上清置冰上待測。
測定步驟：
1 可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上 ，調(diào)節(jié)波長至 405nm ，蒸餾水調(diào)零。
2 臨用前用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將 5 mmol/L pNA 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至 200 、 100 、 50 、 25 、 12.5 、0 μmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。
注 意：
實驗之前建議選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。
關(guān)鍵字： Caspase-8試劑盒 ; Caspase-8ELISA KIT ; Caspase-8ELISA 試劑盒 ;
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