C-a-spase-6活性測(cè)定試劑盒比色法/100T
中文名稱 ：Caspase-6 活性檢測(cè)試劑盒
英文名稱 ：Caspase-6Activity Assay Kit
儲(chǔ)存條件 ：6 個(gè)月
產(chǎn)品包裝 ：盒裝
檢測(cè)方法 ：比色法
有 效 期 ： -20℃
產(chǎn)品規(guī)格 ：20T 、 50T 、 100T
試劑盒的組成和配制：
試劑名稱/規(guī)格 | 20T | 50T | 100T | 保存條件 |
試劑一 | 液體 20mL×1 瓶 | 液體20 mL1瓶 | 液體 25 mL × 1瓶 | -20℃保存 |
試劑二 | 液體30mL×1 瓶 | 液體60 mL×1瓶 | 液體 120mL× 1瓶 | -20℃保存 |
試劑三 | 液體 0.25L × 1 支 | 液體0.55mLx支 | 液體 0.55mL ×2支 | -20℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1mL × 1 支 | 液體1 mLx1支 | 液體1 mL× 1支 | -20℃保存 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Caspase 是參與細(xì)胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含 10 多個(gè)成員。Caspase-6 也稱 Mch-2，其前體蛋白被 granzyme B 剪切后形成活化的 caspase-6 二聚體 ， 可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 Caspase-6 可剪切凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白 PARP ， 剪切核膜 上關(guān)鍵蛋白 LaminA ，其對(duì)于LaminA 的識(shí)別位點(diǎn)是 VEID。
本試劑盒測(cè)定原理基于 Caspase-6 特異水解其多肽底物 Ac-VEID-pNA(N-acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-p-nitroanilide) ， 釋放出游離的硝基苯胺 pNA ，后者呈黃色在 405 nm 具有大吸收峰 ，采用可見光光度比色法測(cè)定。其吸光度值 對(duì)應(yīng)于 Caspase-6的水解活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、 100μL 玻璃比色皿/96 孔板、 臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研 缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量）：
1、培養(yǎng)細(xì)胞： 先收集細(xì)胞到離心管內(nèi) ，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（約 10?個(gè)）加 100 μL 試劑二（若裂 解不充分可提高至 150-200 μL），震蕩重懸沉淀 ， 置冰上靜置 15 min， 4℃ , 15000g 離心 10- 15min ，取上清置冰上 待測(cè)。
2、組織： 按照組織質(zhì)量（g）：試劑二體積（ mL）為 1： 5~10 的比例（建議稱取約 0.1 g 組織，加入 1 mL 試 劑二），冰浴研磨或充分剪碎，置冰上靜置 15 min ，4℃ , 15000g離心 10- 15min ，取上清置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上 ，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 405nm ，蒸餾水調(diào)零。
2 臨用前用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液將 5 mmol/L pNA 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至 200 、 100 、 50 、 25 、 12.5 、0 μmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液待用。
注 意：
實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
關(guān)鍵字： Caspase-6試劑盒 ; Caspase-6ELISA KIT ; Caspase-6ELISA試劑盒 ;
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