金錢白花蛇染料法熒光定量PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 金錢白花蛇染料法熒光定量PCR試劑盒 | 英文名稱 | Bungarus multicinctus Real-Time PCR Kit (SYBR Green Dye Method) |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR2659 |
檢驗原理
本試劑盒基于SYBR Green染料法實時熒光定量PCR技術(shù)，針對金錢白花蛇基因高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物。通過DNA聚合酶催化擴增，SYBR Green染料與雙鏈DNA結(jié)合后釋放熒光信號，儀器實時監(jiān)測熒光強度，實現(xiàn)核酸的定性和定量分析。
試劑組成
金錢白花蛇擴增液：含特異性引物及PCR緩沖成分。
金錢白花蛇反應(yīng)液：含DNA聚合酶、dNTPs及SYBR Green熒光染料。
陽性質(zhì)控品：已知濃度的金錢白花蛇DNA片段（非活體樣本）。
陰性質(zhì)控品：無靶標(biāo)核酸的緩沖液。
操作步驟
樣本處理
提取待測樣本DNA，建議使用商業(yè)核酸提取試劑盒。
陽性對照稀釋（以10E2-10E7拷貝/μL為例）
標(biāo)記離心管（7-2號），每管加入45μL稀釋液。
7號管加入5μL初始陽性對照（1×10E8拷貝/μL），震蕩混勻后依次梯度稀釋至6號管（1×10E6拷貝/μL），冰上保存。
PCR反應(yīng)體系配制
按比例混合擴增液、反應(yīng)液及模板DNA，總反應(yīng)體積20μL。
上機檢測
設(shè)置擴增程序：預(yù)變性（95℃, 5min）→循環(huán)階段（95℃ 15s, 60℃ 30s, 40次）→熔解曲線分析。
結(jié)果判讀
定性：擴增曲線呈“S”形且Ct值≤35為陽性。
定量：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算初始模板濃度。
注意事項
陽性對照稀釋需在獨立區(qū)域操作，避免污染。
使用帶濾芯槍頭，防止氣溶膠污染。
熔解曲線分析可驗證擴增特異性。
儲存與運輸
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
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