禽輪狀病毒A組染料法熒光定量RT-PCR試劑盒
商品屬性
產(chǎn)品名稱 | 禽輪狀病毒A組染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Avian Rotavirus Group A Dye-based Quantitative Real-time RT-PCR Kit |
規(guī)格 | 50T | 貨號 | PR2690 |
產(chǎn)品概述
本試劑盒采用一管式熒光定量RT-PCR技術(shù)，通過特異性引物和染料法檢測體系，實現(xiàn)對禽輪狀病毒A組RNA的定性或定量檢測。適用于科研用途（如病毒溯源、流行病學研究），不可用于臨床診斷。
試劑盒組成
RT-PCR反應(yīng)液：包含逆轉(zhuǎn)錄酶、DNA聚合酶、dNTPs及優(yōu)化緩沖體系。
熒光染料：如SYBR Green等，需避光保存。
陽性對照：非活體DNA片段（10E2-10E7拷貝/μL梯度稀釋標準品），需獨立操作以避免污染。
模板稀釋液：用于標準品稀釋及樣本預(yù)處理。
ROX校正染料（可選）：根據(jù)機型需求添加。
操作步驟
1. 樣本處理
提取待測樣本RNA，建議使用商品化RNA提取試劑盒。
2. 陽性對照稀釋（示例：6個梯度）
標記離心管（7至2號），每管加入45μL模板稀釋液。
按10倍梯度稀釋陽性對照，避免交叉污染。
3. PCR反應(yīng)體系配制（20μL/反應(yīng)）
| 組分 | 體積（μL） |
| RT-PCR反應(yīng)液 | 10 |
| 熒光染料 | 0.5 |
| 引物混合液 | 2 |
| RNA模板 | 2 |
| RNase-free水 | 補至20 |
4. 上機程序
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 15分鐘（可選，根據(jù)病毒RNA特性調(diào)整）。
預(yù)變性：95℃ 2分鐘。
循環(huán)：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號），共40循環(huán)。
注意事項
操作需在無菌環(huán)境下進行，分區(qū)處理樣本、試劑及耗材。
標準品稀釋需使用帶濾芯槍頭，防止氣溶膠污染。
反應(yīng)體系需避光配制，避免熒光淬滅。
不同機型可能需調(diào)整ROX添加量，具體參考儀器說明書。
結(jié)果判讀
閾值設(shè)定：以基線信號3-15循環(huán)的熒光標準差10倍為閾值。
陽性判定：Ct值≤35且擴增曲線呈S型。
陰性對照：應(yīng)無擴增信號（Ct值≥40或無信號）。
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關(guān)鍵字： 禽輪狀病毒A組;染料法熒光定量;RT-PCR試劑盒;
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