檢測原理
基于探針法熒光定量RT-PCR技術，針對禽輪狀病毒A組高度保守基因區(qū)域設計特異性引物及探針，通過實時熒光信號擴增實現(xiàn)病毒核酸的定性與定量檢測。
靈敏度：最低檢測限達100拷貝/反應。
特異性：不與禽類其他病原體核酸發(fā)生交叉反應。
線性范圍：定量檢測覆蓋5個數(shù)量級（10^1–10^6拷貝/μL）。
產(chǎn)品名稱 | 禽輪狀病毒A組探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Avian Rotavirus Group A Probe-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測類型 | PCR檢測 | 產(chǎn)品貨號 | PR4842 |
試劑盒組成
| 成分 | 規(guī)格/說明 |
| qRT-PCR緩沖液 | 500μL |
| 酶混合液 | 50μL（含逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶） |
| 熒光PCR模板稀釋液 | 1mL |
| 引物-探針干粉 | 50T |
| 陽性對照（無傳染性）| 50μL（10^7拷貝/μL） |
操作步驟
1. 標準曲線制備
將陽性對照按10倍梯度稀釋（10^6–10^1拷貝/μL），獨立操作避免污染。
標記離心管（6–1號），依次加入稀釋液與陽性對照，渦旋混勻后冰上保存。
2. 樣本處理
核酸提?。和扑]使用兼容的DNA提取試劑盒，設置陰性（NC）和陽性對照（PC）。
PC制備：用陽性對照稀釋液模擬樣本體積。
3. PCR反應體系（20μL）
每反應包含：10μL緩沖液、0.5μL酶混合液、1μL引物-探針、2μL模板DNA、6.5μL無核酸酶水。
反應程序：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 10分鐘
預變性：95℃ 10分鐘
PCR循環(huán)（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信號）
結(jié)果分析
定量檢測：以標準曲線log值為橫軸、Ct值為縱軸，計算樣本拷貝數(shù)。
定性檢測：
陽性：Ct≤39，且擴增曲線典型。
陰性：Ct≥40或無擴增。
可疑值（39<Ct<40）：需復測確認。
注意事項
分區(qū)操作：樣本處理、試劑配制、PCR擴增需在獨立區(qū)域進行，防止污染。
質(zhì)量控制：每批次實驗需包含陰/陽性對照。
保存條件：試劑-20℃避光保存，運輸需冰袋（2–8℃），避免反復凍融。
局限性：
突變株可能導致假陰性；
樣本質(zhì)量影響檢測準確性。
聲明
本產(chǎn)品僅用于科研，不可作為臨床診斷依據(jù)。操作需符合實驗室生物安全規(guī)范，廢棄物按《微生物實驗室生物安全通則》處理。
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關鍵字： 禽輪狀病毒A組;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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